应用树枝状高分子载体靶向基因治疗前列腺癌的实验研究

《应用树枝状高分子载体靶向基因治疗前列腺癌的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、天津医科大学博士论文中文摘要应用树枝状高分子载体靶向基因治疗前列腺癌的实验研究研究生：赵维明导师：徐勇教授近年来我国的前列腺癌发病率逐年升高。对于局部和全身转移的进展期患者，临床尚无较好的治疗方法。基因治疗自上个世纪九十年代初用于肿瘤的治疗研究以来，被认为是治疗包括前列腺癌等恶性实体肿瘤最有前途的方法。但现阶段基因治疗肿瘤的发展正受一些技术难点的困扰，其中缺乏在体内安全、有效的基因载体问题是瓶颈之一。本研究先以第5代阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物(Generation5PolyamidoamineDendrimers，G5．PAMAM-D)为基因载体，载含自杀基因HSV-tk和表达小发卡R

2、NA(shRNA)的质粒，在体内外进行实验性治疗研究，并在此基础上应用转铁蛋白(Tf)对G5-PAMAM-D进行修饰，获得具有前列腺癌靶向性的载体G5-PAMAM-D—Tf’再以PAMAM-D一"If为载体携表达shRNA的质粒进行靶向前列腺癌的组织特异性RNA于扰治疗研究。为前列腺癌的基因治疗寻找安全、高效、并有靶向性的基因载体。本研究分3个部分．第一部分GS-PAMAM'-D介导HSV--tk／GCV系统对前列腺癌生长的抑制目的考察PAMAM-D作为自杀基因HSV-tk／C,-CV系统载体进行前列腺自杀基因治疗的可行性。方法以第5代PAMAM-D(G5一PAMAM-D)为载体将含增强型

3、荧光蛋白(EGFP)基因片段的质粒pEGFP．C1转染至前列腺癌细胞系PC·3和22Rvl，成功表达EGFP后，再以G5-PAMAM-D将含HSV-tk自杀基因的真核表达质粒pcDNA3-tk转染至前列腺癌细胞系PC．3和22Rvl，转染48h后，对转染的两种细胞给予不同浓度的前体药更昔洛韦(Oanciclovir,GCV)，24h后采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响。制作前列腺癌皮下荷瘤小鼠模型，将G5．PAMAM-D／pcDNA3-tk复合物瘤内注射，24h后腹腔注射C-CV，观察这一复合物体内对肿瘤生长的抑制作用。结果荧光观察及FCM结果证明l天津医科大学博士论文G5．PAMA

4、M-D可将pEGFP．CI转入2种前列腺癌细胞并表达EGFP。采用(35．PAMAM-D将pcDNA3-tk质粒转染PC．3和22Rvl细胞，给不同浓度的前体药G-CV后，实验组细胞与对照组相比有明显浓度依赖性生长抑制，说明PAMAM-D作为载体可在体外将HSV-tk自杀基因递送至前列腺癌细胞中，并在细胞中进行表达，从而使HSV-tk／GCV自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。荷瘤小鼠模型在给予瘤内注射G5-PAMAM-D／pcDNA3-tk，行腹腔注射C,-CV治疗后第40天，治疗组肿瘤体积与2个对照组相比肿瘤生长明显被抑制(P<0．oD，生存时间延长。结论G5．PAMAM-D可做为前列腺腺

5、癌自杀基因治疗的基因载体，有良好的应用前景。第二部分PAMAM-D介导STAT3-shRNA对前列腺癌生长的抑制作用目的考察G5-PAMAM-D作为小发卡RNA(smallhairpinRNA,shRNA)真核表达质粒的载体，进行前列腺癌RNA干扰基因治疗的可行性。方法根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和信号转导子和转录激活子3(STAT3)cDNA序列结构分别设计构建表达EGFPmRNA、S似r3mRNA特异的shRNA真核表达质粒pSilencin94．1-EGFP-shRNA和pSilencin94．1．STAT3．shRNA。在体外以G5-PAMAM—D为载体将质粒pEGFP-C1

6、和pSilencin94．1-EGFP-sb_R．NA共转染前列腺癌细胞PC．3、22Ryl，通过观察EGFP表达反映干扰效果以及转染效率。再以同样的方式将pSHencin94．1．STAT3．shRNA转入前列腺癌细胞系，MTT法检测对细胞生长的抑制作用，丫啶橙染色观察细胞凋亡。制作前列腺癌小鼠模型，将G5．PAMAM-D与质粒psilencin94．1．STAT3．shRNA的混合物注射入荷瘤鼠肿瘤内，观察对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明G5一PAMAM-D可将pSilencin94．1一EGFP-shR．NA转入前列腺癌细胞，并明显沉默EGFP的表达，同样可将pSilenein

7、94．1．STAT3．shRNA有效转入前列腺癌细胞中，明显抑制肿瘤细胞的生长，增加细胞的凋亡。体内实验证明G5-PAMAM-D／pSilencin94．1一STAT3·shRNA可抑制荷瘤鼠前列腺癌的生长，而各对照组肿瘤生长无明显抑制。结论G5．PAMAM-D作为基因载体，可将shRNA的真核表达质粒在体内外转入前列Ⅱ天津医科大学博士论文腺癌组织细胞，并有效表达shRNA，G5．PAMAM-D可能成为应用前景广阔的小干