eb病毒lmp1通过p53调控survivin分子机制的的研究

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1、硕士学位论文中文摘要摘要肿瘤的形成是细胞调节通路及其网络整体紊乱的结果。与正常细胞相比，往往一些通路处于异常激活状态，而有些通路却传递受阻。因此，在肿瘤中，增殖失控、凋亡受阻及侵袭与转移等都是常见的信号转导异常的结果。EB病毒是第一个发现与人类肿瘤相关的DNA致瘤病毒。EB病毒的感染与人类的Burkitt’S淋巴瘤、何杰金氏病、鼻咽癌、肺癌、胃癌和乳腺癌等多种肿瘤的发生相关，鼻咽癌与EB病毒的关系最为密切。其中EB病毒编码的潜伏膜蛋白LMPl是重要的致瘤蛋白，以鼻咽癌为切入点，我们多年的研究工作一直致力于LMPl介导的信号转导通

2、路的研究。LMPl通过NF．rd3、AP．1、JA刚STAT信号转导通路及其之间的cross．talk作用于下游众多的调节基因，其中包括抗凋亡基因survivin和细胞周期表达相关基因p53从而参与细胞增殖、转化、凋亡等多种生物学功能。Survivin是1997年发现的凋亡抑制蛋白lAPs(InhibitorofApoptosisProtein)家族的新成员，与其他IAP家族成员不同的是，它在正常分化的成人组织中很少表达，但在胚胎和发育的胎儿组织以及大多数的肿瘤组织和转化细胞中高度表达。Survivin分子结构中的BIR(Bac

3、ulovirusIAPRepeat)与其抑制凋亡的功能密切相关。Survivin在肿瘤细胞中的表达具有严格的细胞周期依赖性，在G2／M期特异性表达，它具有调控细胞周期和抑制细胞凋亡的双重作用。Survivin的结构中含有一个CDC2／CyclinBl特异性的磷酸化位点，它位于survivinThr34，这个磷酸化位点对于survivin与多聚微管／有丝分裂纺锤体的相关性，以及在有丝分裂期survivin抑制caspase．9的活性是必需的。同时，survivin也可通过移位于核与CDK4结合促进G1／S期的转换。从而提示，sur

4、vivin不仅对G2／M期具有调控功能，同时，硕士学位论文中文摘要在对G1／S期的调控中也具有重要的生物学意义。Survivin抑制细胞凋亡的机制是非常复杂的，它可以通过调节基因的表达，通过蛋白质之间的相互作用以及线粒体的动力学等多种方式实现。我们的工作证实LMPl能够通过活化NF．r．B和AP．1介导抗凋亡蛋白survivin的异常激活。LMPl表达介导survivin核移位，促进细胞Rb磷酸化增加，导致S期演进，促进细胞周期行进，从而促进细胞增殖；LMPl能够同时促进survivin和CDK4的表达以及二者移位于核，并且能够

5、介导两者的结合，这对于G1／S期的演进具有重要作用。LMPl通过survivin介导细胞凋亡的抑制。Survivin反义核酸可抑制survivin表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。这些研究结果为我们进一步探讨EBV-LMPl介导survivin促进细胞增殖和抑制细胞凋亡的分子机制提供了有意义的实验依据。研究发现，许多肿瘤中都存在有survivin的过度表达和野生型p53的缺失或突变。p53基因的突变可能通过细胞内一条或多条信号通路刺激survivin的表达。野生型p53(wt-p53)可以在转录水平抑制survivin表达。在s

6、urvivin启动子上有p53结合位点。p53可以直接结合到survivin的启动子上，还可通过与其他蛋白，如E2F，sin3和HDAC等形成复合物结合到survivin启动子上从而抑制survivin的表达。p53还可以直接结合到cdc2／cyclinBl的催化亚基上，通过抑制cdc2／cyclinBl激酶的活性，使细胞内survivin的磷酸化水平下调。同时，survivin也可通过caspase／Mdm2以及AuroraB对p53在蛋白水平上进行调控。p53基因作为重要的抑癌基因，人类肿瘤中约50％以上与p53基因变化有关

7、。p53是一种核内磷酸化蛋白，是细胞生长周期中负调节因子，与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化、细胞凋亡等重要的生物学功能有关。但与其他肿瘤不同的是，鼻咽癌中p53基因的突变频率很低(<10％)，且出现了p53蛋白积聚的现象。许多研究表明硕士学位论文中文摘要p53在鼻咽癌的发生发展过程中是具有活性的。我们的前期研究发现，永生化鼻咽上皮NP69细胞模型中存在大量游离的野生型的p53，并且其中p53是具有活性的，LMPl能在转录水平和蛋白水平调节p53的表达。我们发现LMPl可通过MAPK(Mitosisactiveprotein

8、kinase)信号转导通路调节p53多个位点的磷酸化，并促进p53的转录活性、反式激活能力以及降低p53与MDM2的结合能力，从而促进LMPl对p53活性和稳定性的调节。同时，我们在其他鼻咽癌细胞模型中的研究工作也证实LMPl可通过活化核转录因子NF．r．B和A