eb病毒潜伏膜蛋白lmp1通过转录因子egfr和共因子tif2调控cyclind1基因的机制研究

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1、分类号UDC硕士学位论文密级EB病毒潜伏膜蛋白LMPl通过转录因子EGFR和共因子TIF2调控cyclinDl基因的机制研究MolecularMechanismsofcyclinD1GeneRegulatedbyEpstein-·BarrVirusEncodedLatentMembraneProtein1viaNuclearEpidermalGrowthFactorReceptorandTranscriptionalIntermediaryFactor2作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：论文

2、答辩日期翌!孑!j：丫石颖病理学与病理生理学湘雅医学院肿瘤研究所曹亚教授陶永光教授答辩委员会主席中南大学2012年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另clDN以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：2整日期：塑!坌年上月三日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位

3、论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：二垒坠一导师签名—也日期：竺年三月上日本课题受如下基金资助：国家自然科学基金资助项目(瘤蛋白LMPl调节转录因子EGFR与共活化子TIF2相互作用的机制研究)批准号：30772482NationalNaturalS

4、cienceFund(No．30772482)We形删tobethegenerationthat彩E厶必the形彩against翻蝴andendsthat绷名锄“．卿／嬲wlllnotrestuntil嬲have刃溯伽么铆：么龙，V在科学上面是没有平坦的大路可走的，只有那在崎岖的小路上攀登不畏劳苦的人，有希望达到光辉的顶点。——卡尔．马克思创新、求实、奉献。——中南大学湘雅医学院肿瘤研究所所训石颖硕士学位论文中文摘要摘要表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)属于受体

5、酪氨酸激酶家族成员，与肿瘤癌变密切相关。我们的前期研究证明在EB病毒(Epstein—Barrvirus，EBV)编码的潜伏膜蛋白LMPl(1atentmembraneprotein1)调控下核EGFR可与cyclinDl启动子结合，且其他的蛋白可能参与这一过程。转录中介因子(Transcriptionalintermediaryfactor2，TIF2)作为一类辅激活因子除与核受体结合外还可与转录因子发生相互作用，同时它也被报道可参与cyclinDl基因转录的精细调控，从而提示我们EGFR与TIF2有可能存在一些

6、新的直接联系。因此本研究以鼻咽癌细胞为模型，以EBVLMPl激活转录因子EGFR和共因子TIF2相互作用调控细胞周期行进为切入点，深入研究EBVLMPl致瘤的分子新机理。我们以LMPl阴性和LMPl阳性表达的鼻咽癌细胞为模型，利用Real·timePCR、Westernblotting、免疫共沉淀、双杂交策略及激光共聚焦技术，对EBVLMPl调控转录因子EGFR和共因子TIF2的转录活化及亚细胞定位进行研究，发现鼻咽癌细胞中EBVLMPl可上调TIF2的蛋白表达并呈剂量依赖性，但对TIF2的mRNA水平没有影响；确

7、定了EBVLMPl调控EGFR和TIF2蛋白相互间形成复合物，且这种相互作用在LMPl的诱导下显著增高，其亚细胞定位在细胞核。进一步为了探讨LMPl激活EGFR和TIF2相互作用参与转录精细调控的分子机制，我们采用ChIP／Re．ChIP、报告基因分析和点突变I本研究得到国家自然科学基金(编号：30772482)资助石颖硕士学位论文中文摘要技术，结合过表达和RNA干扰手段，初步证实cyclinDl基因启动子区存在EGFR和TIF2共结合位点；从转录水平、蛋白水平和mRNA水平确定EBV-LMPl可调控EGFR和TI

8、F2转录活化靶基因cyclinDl，其可能的调节机制是LMPl促使EGFR结合于cyclinDl启动子区并募集TIF2与其相互作用，激活cyclinDl基因转录；EGFR／TIF2复合物对cyclinDl启动活性的影响主要依赖于基因启动子区ATRS序列。最后我们采用MTS方法，通过外源性的转入EGFR／TIF2表达质粒和内源性的敲除EGFR／TIF2的表达，