促红细胞生成素对新生hibd大鼠bcl-2及bax蛋白表达影响

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1、天津医科大学硕士学位论文促红细胞生成素对新生HIBD大鼠Bcl-2及Bax蛋白表达的影响姓名：褚保凤申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：初桂兰20070501天津医科大学硕士研究生学位论文摘要目的围生期窒息引起的缺氧缺血性脑损伤(HIBD)，常危及新生几生命，是导致儿童神经系统伤残的常见原因之一。近年研究发现，促红细胞生成素(EPO)在新生儿HIBD发病机制中起重要作用。本实验通过制各新生大鼠HIBD模型，腹腔注射外源性重组人促红细胞生成素(rhEPO)，观察不同剂量EPO对新生HIBD大鼠脑组织Bcl-2及Bax蛋白

2、表达的影响，探讨EPO神经保护作用的分子机制，以期为临床治疗新生儿HIBD提供有效的方法和途径。方法1．制备HIBD模型：将新生7日龄Wistar大鼠行颈部正中切口，分离结扎左侧颈总动脉后给予低氧(8％02，92％N。)处理2小时，制成HIBD模型。观察缺氧时动物行为变化，并于光镜下观察脑组织病理改变。2．行为能力检查：分别于手术前及缺氧后I小时对每只大鼠进行翻身能力、夹尾左旋测试。3．Bcl一2及Bax蛋白表达测定：42只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、生理盐水对照组、EPO干预组，其中EPO干预

3、组又分为大、中小、剂量三组，每组7只动物，于缺氧结束后立即一次性腹腔注射给药，应用免疫组织化学染色方法，观察给药24小时后Bcl-2及Bax蛋白表达变化。结果1．行为能力检查术前每只大鼠均做翻身能力、夹尾左旋测定，42只全部正常。缺氧后1小时假手术组测定结果同前。经历缺氧缺血的35只大鼠，19只不能翻身，28只出现夹尾左旋，13只表现不能翻身和夹尾左旋同时存在。2．HE染色及光镜检查结果假手术组：脑组织结构及细胞层次清楚，神经元形态正常，无脑水肿。HIBD组；脑组织水肿明显，神经元排列紊乱，胞体皱缩，胞质深染，核浓I天津医

4、科大学硕士研究生学位论文缩，结构不清，伴有胶质细胞增生。，3．Bcl一2蛋白表达检测结果Bcl一2蛋白在假手术组中存在低水平表达，HIBD后表达明显增高，EPO干预组较生理盐水对照组及HIBD组更高。生理盐水对照组与HIBD组相比，EPO大、中、小剂量三组两两相比差异无统计学意义(P>O．05)。其余各组间比较均有显著性差异(P

5、三组两两相比差异无统计学意义(P>0．05)。其余各组间比较均有显著性差异(P<0．05)。5．Bcl一2与Bax比值的变化Bcl一2／Bax在脑组织缺氧缺血性损伤后降低，EPO干预后又升高。生理盐水对照组与HIBD组相比，EPO大、中、小剂量三组两两相比差异无统计学意义(P>O．05)。其余各组间比较均有显著性差异(P<0．05)。结论1．通过对缺氧缺血后动物行为能力观察及脑组织病理学检查，证实新生鼠HIBD模型制作成功。2。EPO通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，下调促凋亡蛋白Bax表达，改变Bcl一2／Bax，抑制脑

6、细胞凋亡起到神经保护作用，为EPo临床治疗新生儿HIBD提供了更深层次的理论依据。【关键词】脑缺氧{脑缺血；新生鼠：EPO：Bcl-2；BaxⅡ天津医科大学硕士研究生学位论文AbstractObjectiveHypoxic—ischemicbraindamage(HIBD)causedbyperinatalasphyxiaoftenleadstothedeathofneonatesorsevereneurologicalsequelae．Ithasbeenthesinglemostprobleminneonatalperi

7、od．Thereisincreasingevidencethatrecombinanthumanerythropoietinplaysanimportantroleinthepathogenesisofneonatehypoxic—ischemicbraindamage．IntheexperimentwhenHIBDmodelwasestablished，differentEPOdosageswereintraperitoneallyinjected．ThenwestudytheeffectsofEPOonexpressi

8、onofBcl-2andBaxprotein，toexploretheneuroprotectivemolecularmechanismofEPO．OurexperimentmayprovideanefficacioustreatmentforclinicaltherapyofneonatalHIBD．