靶向survivinsirna干扰ej-28膀胱肿瘤细胞实验的研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文靶向survivin的siRNA干扰EJ-28膀胱肿瘤细胞的实验研究姓名：吴跃申请学位级别：硕士专业：外科学（泌尿外）指导教师：苟欣20070501重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写英文全称BSBovinesertlm符号说明中文全称小牛血清RPMI．1640RooseveltParkMemorialInstituteRPMI-1640培养基PBSEDl’ADMS0M[1TFCMnPRNA测AmRNAASODNRNAiMedium-1640phosphate-buffere

2、dsolution磷酸盐缓冲溶液Ethylenediaminetetraaeeticaeid7．2胺四乙酸dimethylsulfoxide-qa基亚砜3一(4，5一dimethylthyiazol—E-y0-2，5一dip-henyltetrazoliumbromidflowcytometryinhibitorofapoptosisproteinribonucleicacidsmallinterferingRNAmessengerRNAAntisenseOligodeoxynucleofideRNA

3、interfering四甲基偶氮唑盐流式细胞术凋亡抑制蛋白核糖核酸小干扰RNA信使RNA反义寡核苷酸RNA干扰RNAi．MateRNAinterferingMATE脂质体NⅣ田22NtR钳讧NuclearMatrixProtein22核基质蛋白22Nucleotidecarboxyfluorescein核苷羧基荧光素重庆医科大学硬士研究生学位论文AnnexinVAnnexinVPSPhosphatidylserineFITCnuOresceinis删ocy龇atePIPropidiomiodideDE

4、PCDiethylPyrocarbonateHHourMinMinuteMlMilliliterGGrammeRpmrevolutionperminute2磷脂结合蛋白V磷脂酰丝氨酸异硫氰酸荧光素碘化丙啶焦碳酸二乙酯小时分钟毫升克每分钟转速重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料

5、，与我N-r作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资科若有不实之处，本人承担一切相关责任．羊位论文作者签名：号、玖日期：学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期问论文工作的知识产权单位属重庆医科大学．本人保证毕业高校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)；可以

6、采用影印、缩印或其他手段保存论文．论文作者签名指导教师签名：旮复坎重庆医科大学硕士研究生学位论文响。靶向survivin的siRNA干扰EJ-28膀胱肿瘤细胞的实验研究1。摘要目的观察靶向survivin的不同siRNA对EJ．28细胞增殖和凋亡的影方法通过化学合成方法合成3对siRNA和1对荧光标记的阴性对照siRNA。脂质体RNAi．MATE转染荧光标记的siRNA后，在荧光显微镜下观察转染效率。转染24h、48h和72h后，MTT法检测siRNA对EJ-28细胞增殖的影响；AnnexinV-FI

7、TC流式细胞(FlowCytometry，FCM)检钡tJEJ．28细胞的凋亡率。转染最有效的siRNA至EJ-28细胞，48h后用，采透射电镜观察细胞超微结构；FCM检测细胞周期；免疫荧光检测转染后EJ．28细胞survivin基因表达的变化。结果1．当siRNA和RNAi-MATE的重量比为1：3时，转染效率最高为(59．15：t：1．44)％；靶向survivin的序列特异性siRNA均能抑制EJ-28细胞的增殖，与siRNAl67、siRNA389相比，siRNAl64抑制细胞增殖最强(P<0

8、．05)，转染48h后的抑制率最高(41．32--t：2．54)％；转染48h后，siRNAl64组诱导EJ一28细胞的凋亡率最高(13．23：t：0．25)％。2．在透射电镜下观察到转染后的EJ-28细胞典型的凋亡形态改变，本课题由重庆市卫生局基金资助(04—2—130)重庆医科大学硕士研究生学位论文如细胞缩小，核染色质浓染、边集，并可见凋亡小体。3．与对照组相比，转染siRNAl64的EJ-28细胞的细胞周期主要停留在G2／M期，差异明显(P