精子成熟相关蛋白的研究

《精子成熟相关蛋白的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海交通大学硕士学位论文精子成熟相关蛋白的研究姓名：瞿飞申请学位级别：硕士专业：人体解剖与组织胚胎学指导教师：丁之德20070501上海交通大学医学院2004级硕士学位论文精子成熟相关蛋白的研究摘要对于男性生殖或者受精而言，正常的精子是必要的条件。伴随附睾内转运的过程，哺乳动物的精子会发生形态学、生化以及生理等方面的改变，特别是运动能力的获得，因为无论是在女性生殖道内朝向卵细胞的长途跋涉，还是后续的穿卵过程，都必须依赖精子的运动能力。在我们的前期研究中，曾首次发现锌α2糖蛋白（ZAG）和内质网蛋白29（ERp29）前体都与精子的成

2、熟相关。实验结果显示：人精浆中的ZAG可与α1抗胰蛋白酶相结合，进而激活附睾头部不能运动的精子向前运动。其次，通过高分辨率的二维电泳结合质谱技术研究发现SD大鼠精子上存在ERp29前体蛋白，并证实该蛋白含量随着精子在附睾内的成熟过程而逐渐增加。然而，人精子上是否含有ZAG，ZAG影响精子运动的机制如何；另外，对于ERp29前体而言，附睾精子上的是否属于膜蛋白，而这种蛋白是否与附睾上皮的分泌相关，由此可见，这些问题目前还都尚待探究。基于上述的问题，在本课题研究中，我们克隆表达了人类ZAG，并制备出相应的多克隆抗体。然后运用激光共聚焦

3、显微镜和流式细胞仪检测等技术在人精子上首次将ZAG蛋白得到了验证并进行定位。此4上海交通大学医学院2004级硕士学位论文外，我们还发现该多克隆抗体能够显著抑制正常精液中上游精子的运动，并能同时降低精子胞内cAMP和PKA水平。其次，SD大鼠附睾精子的ERp29前体蛋白被证实为精子膜蛋白，并且尾部精子的含量都比头部的显著增高。与此同时，免疫组化结果也显示在附睾上皮组织中ERp29前体蛋白的表达量同样是尾部高于头部。本研究课题对于ZAG和ERp29结构和功能的探究目前仅是一个开端，然而，对于清晰地理解这些生理过程的全部生物学机制而言是

4、远远不够的，这还需要大量的其他相关实验证据去证实，尤其是进一步理解和阐明这些蛋白与精子之间的作用机理。关键词：ERp29前体，附睾，激光共聚焦显微镜，精子，ZAG蛋白5上海交通大学医学院2004级硕士学位论文IDENTIFICATIONOFPROTEINSRELATEDWITHSPERMATOZOAMATURATIONABSTRACTNormalspermisessentialformalereproductionornaturalfertilization.Duringepididymaltransit,mammalianspe

5、rmatozoaundergomorphological,biochemical,andphysiologicalmodifications,inparticularly,acquiringtheabilityofmotility.Becauseboththelongdistancejourneyduringthefemalereproductivetractandthesubsequentpenetrationoftheextracellularmatricessurroundingtheeggrelyonthemotility

6、ofthespermatozoa.Inourpreviousstudies,twoproteinsrelatedwithspermatozoamaturationwereiniatiallyidentified:onewasZn-alpha2-glycoprotein(ZAG);theotherwastheendoplasmicreticulumprotein(ERp29)precursor.OurdatasupportedthefactthatZAGinhumanseminalplasmamightbeintegratedwit

7、halpha-1-antitrypsin(AAT)andwascapableofinitiatingforwardmotilityinimmature,immotilespermatozoa.Ontheotherhand,theERp29precursor,primaryreportedinSprague-Dawleyratspermatozoa,wasapparentlyup-regulatedinspermatozoaalongthecaputandcaudalregionsofepididymis,foregoneinves

8、tigatedbyhigh-resolutiontwo-dimensionalgelelectrophoresis(2-DE)incombinationwithmassspectrometry.6上海交通大学医学院2004级硕士学位论文Howeve