精子dna结构完整性与年龄、精子浓度、活力及形态的相关性研究

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1、精子DNA结构完整性与年龄、精子浓度、活力及形态的相关性研究摘要：目的探讨精子DNA结构完整率与不育患者年龄、精子浓度、活力及形态的相关性。方法回顾性分析2013年1月〜2014年5月到我中心生殖医学研究所行精子DNA结构完整性检查的不育症患者874例，以染色质扩散法，进行检测，其中异常者80例。结果DNA结构完整率正常组与异常组在年龄、精子浓度、活力及形态学有无统计学差异。结论年龄、精子浓度、活力均跟精子DNA结构完整性有相关性，精子形态学与精子DNA结构完整性无明显相关性。关键词：年齡；精子浓度；精子活力；精子形态；精子DNA结构完整性在不育夫妇中，男性不育因素约

2、占50%［1］，精子DNA损伤可能影响辅助生殖技术(ART)的结局，增加复发性自然流产的发生率及卵胞浆内单精子注射(ICSI)后代的遗传风险等相关风险［2］。因此精子DNA完整性检测不仅有助于探索不育的病因，而且有望成为ART治疗结局的重要评估手段［3］。睾丸局部温度增高、严重身心疾病、高热、环境毒物、吸烟、嗜酒、药物和年龄增高等原因都可能造成精子DNA的损伤，相关研究证实，空气污染和吸烟均会导致精子DNA精子DNA结构完整性与年龄、精子浓度、活力及形态的相关性研究摘要：目的探讨精子DNA结构完整率与不育患者年龄、精子浓度、活力及形态的相关性。方法回顾性分析2013年

3、1月〜2014年5月到我中心生殖医学研究所行精子DNA结构完整性检查的不育症患者874例，以染色质扩散法，进行检测，其中异常者80例。结果DNA结构完整率正常组与异常组在年龄、精子浓度、活力及形态学有无统计学差异。结论年龄、精子浓度、活力均跟精子DNA结构完整性有相关性，精子形态学与精子DNA结构完整性无明显相关性。关键词：年齡；精子浓度；精子活力；精子形态；精子DNA结构完整性在不育夫妇中，男性不育因素约占50%［1］，精子DNA损伤可能影响辅助生殖技术(ART)的结局，增加复发性自然流产的发生率及卵胞浆内单精子注射(ICSI)后代的遗传风险等相关风险［2］。因此精

4、子DNA完整性检测不仅有助于探索不育的病因，而且有望成为ART治疗结局的重要评估手段［3］。睾丸局部温度增高、严重身心疾病、高热、环境毒物、吸烟、嗜酒、药物和年龄增高等原因都可能造成精子DNA的损伤，相关研究证实，空气污染和吸烟均会导致精子DNA的碎片化程度增高［4］。本研究通过分析患者的精子浓度、活力及形态的常规检查和精子DNA结构完整性检测结果，并结合患者年龄，以探讨不育患者年龄、精子浓度、活力及形态学与精子DNA完整性的相关性。1资料与方法1.1一般资料选择2013年1月〜2014年5月在洛阳市妇女儿童医疗保健中心生殖医学研究所就诊的行精子DNA完整性检测的87

5、4例男性不育患者作为本次研究对象。纳入标准为：年龄在20〜50岁（含20及50岁）的身体健康、无家族遗传性疾病、无睾丸外伤及性功能障碍病史、无不良生活习惯（嗜酒、吸毒等），睾丸、附睾及输精管体检无明显异常［5］的男性患者。1.2方法1.2.1精液标本收集禁欲2〜7d，手淫法取精液于一次性精液采集器内，置37°C温箱液化，常规记录精液的体积、pH值。1.2.2精液常规检查采用康泰CMS100医学影像学工作站【康泰精子质量析系统】分析精子的浓度、活力。精液标本洗涤后，涂片，以（台资）珠海贝索生物技术有限公司的Diff-Quik试剂快速染色，应用康泰CMSW0医学影像学工作

6、站【康泰精子质量析系统】分析精子形态。1.2.3精子DNA碎片检测本研究方法采用精子染色质扩散法，试剂选用深圳市博锐德生物科技有限公司生产的精子DNA碎片检测试剂盒。精液标本主要处理过程：常规检查后以生理盐水调整液化的新鲜精子浓度至5〜10X106/ml。取出精子浓度为5〜10X106/ml的待测标本60ul加入已熔化的易熔凝胶管，充分混匀，37°C孵育待用。将包被载玻片置于2〜8°C冰箱预冷5min取出，迅速加入30u1精子凝胶混合液于载玻片上，迅速盖上盖玻片，置于2〜8°C冰箱，使其凝固。5min后从冰箱中取出载玻片，小心移去覆盖在上面的盖玻片。将载玻片立即垂直浸

7、入盛有反应液A的反应池，20〜28°C准确反应7min，取出载玻片，滤纸吸去背面及侧面残存液体，再将载玻片垂直浸入盛有反应液B的反应池内，20〜28°C准确反应25min,取出载玻片，滤纸吸去背面及侧面残存液体，再将载玻片水平浸入蒸榴水中5min,其间换水1〜2次。将载玻片依次放入分别盛有70%、90%和100%乙醇的反应池中各2min。空气中自然干燥后，载玻片以瑞氏染液15〜20滴覆盖，稍等片刻再缓慢地加入瑞氏缓冲液30〜40滴，以洗耳球轻轻吹打混合染液，室温15min后以流水轻轻冲洗染片。自然干燥或吹干后，在高倍显微镜下观察500个精子，计数存在