影响水牛精子分离和冷冻后精子质量相关因素的研究

《影响水牛精子分离和冷冻后精子质量相关因素的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号S墨2三：墨±三UDC密级博士学位论文影响水牛精子分离和冷冻后精子质量相关因素的研究宋雪梅论文答辩日期2Q12：§：25学位授予日期2Q!圣：圣答辩委员会主席廑生坚麴拯论文评阅人本研究由国家高技术研究发展计划(863计划)项目(批准号：2008AAl01004)、国家自然科学基金资助项目(批准号：31160458)、广西自然基金(2010GⅫSFD013023)共同资助广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的研究成果，也不包含本

2、人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均己在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。／跻保密。(请在以上相应方框内打“√”)论文作者签名指导教师签名作者联系电话日期：2D／)、D‘

3、、／弓日期zpJ2、口‘、J弓删陈x批门验@以‰影响水牛精子分离和冷冻后精子质量相关因素的研究摘要性别控制技术可以推动家畜育种进程和加快繁殖人们所期望的性别后代。尽管分离水牛X和Y精子性别控制技术体系已经建立，但分离精子用于体外受精后的囊胚发育率和人工授精后的受胎率仍低于未分离精子。精子分离及冷冻过程伴随着精液的高倍稀释、精子核染色、紫外激光照射和冷冻保存等处理程序，这些程序可能对精子的活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、DNA完整性和凋亡等产生影响。本研究探讨了水牛精子分离及冷冻程序不同处理对(新鲜、染色、分离和冷冻)精子细胞器的损伤，旨在优化水牛精子分离及冷冻程序

4、，以期提高分离精子的质量，为水牛品种改良提供有力的技术保障。具体研究内容包括以下几个部分：1．探讨水牛精子分离过程中不同处理(新鲜、染色、分离和冷冻)精子的活力、质膜完整性、凋亡和DNA完整性的变化。结果表明，分离组和冷冻组的精子活力比新鲜组和染色组低(54．72％，52．38％VS．98．07％，96．41％，P<0．05)。荧光显微镜法和流式细胞仪法检测精子质膜完整性的试验结果均表明，新鲜组、染色组和分离组的精子质膜完整率差异不显著(尸>O．05)，但均显著高于冷冻组(72．12％，69．39％，77．26％VS．58．45％；64．74％，63．69％，66．25％VS

5、．36．98％，P<0．05)。精子凋亡方面，荧光显微镜法和流式细胞仪法检测的试验结果均表明，新鲜组的凋亡率最低，显著低于分离组和冷冻组(8．11％VS．13．23％，18．74％；7．56％VS．12．86％，22．4％，P<0．05)。精子染色质扩散试验(SCD)和精子染色质结构分析法(SCSA)检测精子DNA损伤率的试验结果均表明，分离组精子的DNA损伤率最低，显著低于新鲜组、染色组和冷冻组(O．47％VS．2．23％，2．25％，2．26％；0．51％VS．2．55％，2．64％，2．15％，P<0．05)。2．研究冷冻保存的不同公牛个体分离精子与未分离精子的活力、质

6、膜完整性、凋亡和DNA完整性的变化。精子图像分析仪检测结果表明，3头尼里拉菲水牛分离精子的活力均显著低于未分离精子，分别为38．9％VS．59．6％；35．8％VS．58．1％；34％VS．59．1％(P

7、％VS．41．7％，51．6％VS．43．3％，P<0．05)。荧光显微镜法检测结果表明，3头尼里拉菲水牛分离精子的凋亡率均比未分离精子高(28．3％VS．21．1％，31．5％VS．23．6％，32％VS．23％，P<0．05)，其中3号公牛分离精子的凋亡率高于其它两头公牛。3．研究水牛精子分离及冷冻程序各稀释液(染色液、收集液和冷冻液)中添加叶酸或谷胱甘肽对精子的活力、质膜完整性、凋亡和DNA完整性的影响。试验结果表明，在水牛精子分离及冷冻程序各稀释液(染色液、收集液和冷冻液)中添加叶酸或谷胱甘肽后