精子冷冻贮存.doc

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1、精子冷冻贮存6.1引言精子冷冻保存是男科实验室工作中的一个重要组成部分，特别对不孕不育门诊的男科实验室来说。从19世纪40年代末起，人类就开始研究精子低温生物学。发现甘油能保护精子免受冷冻损伤，可以将人类精子冷藏在–79℃的干冰上(Polgeetal.,1949;Bunge&herman,1953;Bungeetal.,1954)。随着液氮广泛应用，人类精子冷冻贮存技术取得快速发展，在许多国家建立起商业用途的精子库和国际间合作服务项目(Perloffetal.,1964;Davidetal.,1980;Clarkeetal.,1997;Leiboetal.,2002)。由于采用不同的冷

2、冻保护剂和不同冷冻程序，出现许多冷冻贮存实验设计方案。冻融后细胞存活率主要取决于细胞内冰晶形成量能降低至何种程度，通过选择恰当的冷冻保护剂和采用最适冷冻速率和复融速率来减少细胞内水形成冰晶提高细胞的存活率(Sherman,1990;Keel&Webster,1993;Watson,1995)。特别在复融过程中，当精子处于–130℃（玻璃化转化状态的关键温度）以上时间太长，细胞内有害的冰晶增多发生重结晶。人类精子能够耐受一定范围内的冷冻和复融率。它们对快速冷冻（冷体克）产生损伤不敏感，主要原因可能是精子细胞膜中脂质双分子层结构的不饱和脂肪酸增加细胞膜流动性。而且因为细胞内水分含量少（约为

3、50%），精子比其它细胞更能耐受低温导致损伤。但是低温仍对精子功能仍产生不良影响，特别是对精子活力影响比较大。一般而言，只有大约50%的活动精子能在冻存后复苏保持活力(Keel&Webster,1993)。优化精子冷冻保存方法减低对活动精子的损害从而提高妊娠率(Woodsetal.,2004)。影响供精人工授精的妊娠率的因素包括复融后精子质量、人工授精的时机，而最为关键的是受方因素如年龄，前次供精妊娠情况以及与排卵、子宫输卵管相关疾病(LeLannou&Lansac,1993)。如果精子保存方法合适，精子质量不会随着冻存时间的延长而下降。冷冻保存超过28年的精子仍能使妇女受孕分娩婴儿(

4、Clarkeetal.,2006;Feldschuhetal.,2005)。精子冷冻可适用于很多情况（见表6.1），在某些特殊情况下，冻存过程需要进行一些更改（见章节6.2.2）。框6.1精子冷冻保存的适应症供精供精是对具有生育能力的供精者精液进行冷冻保存以便将来使用。供精者可由精子库或诊所进行招募，他们精子可以匿名使用。在某些替代的情况，受者也可了解供者的基本情况。供精可以用于AI、IUI、IVF、或者ICSI。1．没有活精子或者不适合ICSI使用长头精子不育男性患者的伴侣，或冶疗失败，冶疗费用太高。2．能传给下一代的遗传疾病。3．血型不符导致婴儿溶血性贫血。4．复发性流产，供精能提

5、供成功妊娠。5．想怀孕的单身育龄女性。供精受孕需要严格遵守当地和国家关于遗传和传染病筛查的法律法规。生育力保护男性在进行有可能影响生育能力的活动之前，可以通过精液冷冻保存生殖能力。具体如下：1．输精管切除（考虑到将来存在婚姻状态改变可能性或想再要一个孩子）。2．接受有可能永久损害生精功能的细胞毒性药物或者放射治疗。3．从事危险职业的工作如军队，在允许遗腹子出生的国家。不孕症治疗在以下情况下，可以进行精子冷冻以备AIH、IUI、IVF、或者ICSI治疗：1.严重少精子症或者精液中活动精子间断出现。2．不育症的治疗效果不能持久，如生殖管道堵塞手术再通或者是下丘脑垂体性腺发育不良的促性腺激素

6、治疗。3．通过辅助方法收集到的精液，如脊髓受损的病人辅助射精，逆行射精病人尿液中收集精子，或者通过手术方式从生精管道中收集精子。4．在辅助生育治疗过程在取卵日或者AIH日不能留取新鲜的精液。阻断传染性疾病的传播经抗逆转录病毒治疗的HIV感染患者，没有检出病毒的精液可以冷冻保存，这些精子可用于IUI，IVF，或者ICSI，这样就能够避免妻子在受孕过程中受HIV感染危险。注1：在保存生育力或者不育症治疗中的精子冷冻，尽可能保存够10次或以上人工受精使用的精子量，这样才能够提高妊娠成功率。而异常精液为AIH而冻存多份精液并不见得很有用。注2：在ICSI过程中1个精子就足够让1个卵子受精，所有

7、的活动精子都值得冻存。注3：在进行有可能造成不育的治疗前，冻存精液有很大的心理意义，因为这样能够让病人对未来充满希望。病人在接受细胞毒性药物治疗或者放射治疗的之前，应该把精液冻起来，因为这些治疗过程都对精子有害。所有需要进行放化疗的病人都应尽可能的保存精子。人类精子冷冻和贮存是一个很复杂的过程，实验室工作人员不仅需要有高度的责任感，而且需要对综合风险进行评估。框6.2冻存和贮存人类精子的风险评估在评估人类精子冷冻和贮存过程中危险因素时，应该充分