核心蛋白聚糖对肺腺癌细胞生长侵袭影响及其靶向治疗实验的研究

《核心蛋白聚糖对肺腺癌细胞生长侵袭影响及其靶向治疗实验的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中南大学博士学位论文核心蛋白聚糖对肺腺癌细胞生长侵袭的影响及其靶向治疗的实验研究姓名：梁硕申请学位级别：博士专业：呼吸内科指导教师：胡成平20070501博士学位论文中文摘要摘要核心蛋白聚糖对肺腺癌细胞生长侵袭的影响及其靶向治疗研究背景肿瘤演变的最终归宿取决于肿瘤与微环境的相互作用，两者的互动关系成为近年肿瘤研究的热点与难点。肿瘤的发生、发展、侵袭及转移可以看作是对这种动态平衡的破坏。细胞的微环境主要包括细胞外基质，直接接触的相邻细胞，生长因子、激素等可溶性介质及间质组织。核心蛋白聚糖(Decorin)是细胞外基质的重要组成成分，是一种在体内组织分布广泛，可以和多种生长因子及细胞因子

2、结合，参与细胞生长调节及组织重塑过程的小分子蛋白聚糖。近年来在国际上广泛受注目。许多研究结果表明Decorin是一种抗增殖因子，与肿瘤的发生、发展、生长密切相关，极可能是一种肿瘤抑制物，这就提示Decorin有可能成为新的抗肿瘤药物。Decorin由一个球形的核心蛋白和一条含CS／DS的糖胺聚糖(GAG)组成。其分子量为92．5kDa，核心蛋白为40kDa，属于小分子间质性PG家族成员，又称为PGII，PG40，因最早发现其具有修饰胶原作用又称为饰胶蛋白。为进一步了解decorin与肿瘤的关系，国内外学者通过直接干预、原位杂交和基因转染等技术对于肝癌、结肠癌、齿龈癌、卵巢癌、肾癌及胃

3、癌等方面进行了研究。表明Decorin对多种肿瘤细胞有抑制作用，其机制可能是Ddecorin可与转化生长因子一[3(TGF．13)结合，抑制TGF．B的生物活性【191；2)decorin使P21表达增加，抑制肿瘤细胞生长120J。目前已明确TGF—B和p21对肺癌有作用，但缺少decorin对肺癌细胞生长影响的研究报道，因此本课题以人肺腺癌细胞株A549及裸鼠移植瘤模型为研究对象，进行了三个部分研究：第一部分．decorin对人肺腺癌细胞株A549体外生长的影响；第二部分．decorin对人肺博士学位论文中文摘要腺癌细胞粘附、迁延及侵袭能力的影响；第三部分．decorin靶向治疗裸

4、鼠人肺腺癌A549移植瘤的实验研究。了解decorin对肺腺癌细胞体外生长及侵袭力的影响，并探讨其可能机制，进一步观察decorin对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。旨在为探讨decorin在肺腺癌形成机制中的作用提供理论依据，为肺腺癌的治疗提供新的思路。方法l细胞培养人肺腺癌细胞株A549培养于RPMI．1640培养液中，取对数生长期细胞用于实验。2MTT法检测decorin对人肺腺癌细胞A549生长的影响对数生长期细胞加入decorin。使最终浓度为0、2．5、5、10、20、30、40I_tg／ml，实验分为7组，每组设3个复孔。7组细胞分别培养0ll，24h,48h,72h，96h

5、，120h后行MTT实验。酶标仪上测定波长为490nm，计算A549细胞的存活率。3流式细胞术检测细胞增殖和凋亡比率收集对数期细胞与浓度为0、5、10、20、30、40p咖l的decorin共同孵育0．96h，收集细胞于离心管内，离心，洗涤，固定，染色，置流式细胞仪上，每份标本测定20000个细胞，测量速率为150～200个细胞／s。用MultiCycleforWindows软件分析被采集资料，计算细胞凋亡比率。4RT．PCR法检测decorin对其mRNA的表达的影响收集对数期细胞与浓度为O、10、20、30、40、50pg／ml的decorin共同孵育24h，按照decorin的

6、浓度分为5组，进行RNA提取，定量后以其为模板逆转录合成cDNA链，然后用引物进行PCR扩增，产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测，decorinmRNA的表达量通过与内对照光密度的比较来判断。5Elisa法检测TGF．6蛋白的表达收集对数期细胞，加decorin，使最终浓度为对照组0pg／ml、实验Ⅱ博士学位论文中文摘要组30ttg／ml，每个组设定3复孔，培养4d，激活标本，建立标准曲线，检测。6Westernblot法检测p21蛋白的表达收集对数期细胞，加decorin，使最终浓度为对照组0ttg／ml、实验组30／Llg／ml，细胞提取细胞中总蛋白，测定出样品的蛋白质含量，然后将蛋白

7、质在聚丙烯酰胺凝胶电泳，染色，转膜观察结果。7decorin对A549细胞体外粘附、侵袭及迁移的影响检测收集对数期细胞，加dec,oril"l，使最终浓度为对照组0pg／ml、实验组2．5pg／ml。包被及水化基底膜，接种及培养细胞，然后MTr比色法检测，计算细胞粘附率。Transwelldx室铺Malrigel胶，培养细胞，趋化，固定，染色，显微镜下计数，计算侵袭率。包被及水化基底膜，制备培养单层细胞，用人-rgU痕法，在相差显微镜下随机选择5个100x