小叶莲化学指纹图谱探究

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1、小叶莲化学指纹图谱探究［摘要］目的：研究小叶莲的化学成分指纹图谱，评价小叶莲商品药材质量，并比较桃儿七不同药用部分之间的主要成分差异，为临床安全、合理应用提供依据。方法：采用小叶莲HPLC指纹图谱方法，测定了12份小叶莲的指纹图谱，确定了20个色谱峰作为共有峰，并指认了其中12个色谱峰；运用该方法比较了桃儿七根及根茎与小叶莲指纹图谱的差异，通过相似度评价和聚类分析对图谱数据进行分析。结果：本研究首次报道了小叶莲中4个黄酮类成分；首次指认了小叶莲指纹图谱中11个色谱峰，包括9个黄酮和2个木脂素类成分；桃儿七不同药用部分化学成分存在较明显的差异，小叶莲主要含异戊烯

2、基黄酮类成分，桃儿七根和根茎主要含鬼臼毒素和简单取代的黄酮及其昔类成分。结论：该指纹图谱方法可以作为评价比较小叶莲、桃儿七根及根茎中黄酮类和木脂素类成分的相对含量及其质量的依据。同时，为小叶莲、桃儿七根及根茎不同药用部分的药效学差异研究提供参考。［关键词］小叶莲；桃儿七；HPLC；指纹图谱小叶莲系藏族习用药材，为小糜科植物桃儿七Sinopodophyllumhexandrum(Royle)Ying的干燥成熟果实。《中国药典》2010年版收载小叶莲具有调经活血功能，用于治疗多种妇科疾病［1］。桃儿七的根及根茎因主要成分为鬼臼毒素类木脂素，与小漿科八角莲属、山荷叶

3、属植物的地下部分一起，被称为“鬼臼类药材”。具有较强的抗肿瘤活性，常用作抗肿瘤药物的原料药［2］。小叶莲的指纹图谱研究仅见一篇报道：陈燕等［3］采用HPLC法，对10批西藏自治区不同野生区、不同施肥条件人工引种栽培以及不同物理晾晒方法的桃儿七果实（小叶莲）进行了指纹图谱研究，以鬼臼毒素为参照物，从10批样品图谱的共有指纹区标定了25个共有峰，并以共有模式（对照图谱）为参照谱，计算10批样品的相似度，除1份样品（0.88）外，其余9份样品相似度均大于0.93,为桃儿七药材GAP栽培的可行性提供科学依据；文中除鬼臼毒素外，未对其他色谱峰进行指认和鉴定。桃儿七根及根

4、茎与其他鬼臼类药材的HPLC指纹图谱研究共有6篇文献报道：熊文勇等［4］建立了6个不同产地含19个共有峰的桃儿七HPLC指纹图谱，并进行相似度比较；利用鬼臼毒素为内参比物，计算了指纹图谱中共有峰的相对含量。粟晓黎等［5］以鬼臼毒素为分析对象，建立了桃儿七（根及根茎）指纹图谱，并发现桃儿七与外部性状相似的威灵仙、龙胆的HPLC图谱存在明显差异；另外建立了桃儿七、八角莲LC-MS指纹图谱，分别指认了桃儿七中7个和八角莲中5个鬼臼毒素类化合物［6］。杨光义等［7］对10批鬼臼类中药（6批山荷叶、3批八角莲、1批六角莲）HPLC指纹图谱进行分析，建立了鬼臼类中药的对照

5、指纹图谱，确定了4个共有峰作为基本特征峰。袁娅［8］建立了包含色谱和光谱信息的八角莲二维指纹图谱［8］。ZhouY等⑼利用LC-MS对鬼臼类药材（8批八角莲、3批六角莲、2批桃儿七根及根茎）进行指纹图谱研究，指认了其中15个特有峰，包括桝皮素、山奈酚、2个黄酮昔以及11个木脂素类成分。总结以上文献，作者发现关于小叶莲与鬼臼类药材的化学成分指纹图谱研究大多局限在以鬼臼毒素为主的木脂素类成分，其他化学成分指认归属不详［3-8］；鬼臼毒素作为桃儿七中的活性成分，但同时是毒性成分，有服用鬼臼药酒而引起中毒事件的报道［10］0本课题组前期研究表明，小叶莲中含有大量的黄酮

6、（特别是含异戊烯基取代的黄酮）类化合物。因此，在小叶莲的HPLC指纹图谱研究中需要体现更多的化学成分信息。作者在化学成分研究和液质联用分析的基础上，对小叶莲的化学成分指纹图谱进行了研究，建立了小叶莲的HPLC指纹图谱方法，确定20个色谱峰作为共有峰，并通过与对照品对照和液质联用法确定和推测了其中12个色谱峰，分别为芦丁、桝皮素-3-0-B-D-葡萄糖昔、山奈酚-3-0-B-D-葡萄糖昔、桝皮素、山奈酚、鬼臼毒素、47-去甲去氧鬼臼毒素、8-异戊烯基桝皮素、8-异戊烯基桝皮素3-甲瞇、去氧鬼臼毒素、8-异戊烯基山亲酚、8,2’-二异戊烯基桝皮素3-甲瞇，除鬼臼毒

7、素外，其余11个色谱峰为小叶莲指纹图谱中首次指认,其中桝皮素-3-0-B-D-葡萄糖昔、山奈酚-3-0-3-D-葡萄糖昔、8-异戊烯基桝皮素和8-异戊烯基楣皮素3-甲瞇为小叶莲中首次报道。为确保小叶莲用药的安全性，本实验利用建立的小叶莲指纹图谱方法，比较了桃儿七不同药用部分的指纹图谱差异，为小叶莲、桃儿七根及根茎的药效物质基础研究、质量评价和安全性评价提供了依据。1材料美国Agilent1200系列高效液相色谱仪（G1322A在线真空脱气机、G1312A二元梯度泵、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315B二极管阵列检测器）；AgilentZor

8、baxSB-C18色谱柱（4.6mmX