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1、川苇药材HPLC指纹图谱探究摘要：目的建立川苇药材的高效液相色谱指纹图谱。方法使用色谱柱ThermoC18(250mmX4.6mm,5Pm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱，柱温25°C,流速1.0mL/min,检测波长323nm。通过提取11个色谱峰作为指纹图谱共有峰，分别采用相似度评价，聚类分析和主成分分析等方法，对所收集的18批样品进行系统比较与归类。结果通过比较18批川苇的色谱图，确定了11个共有峰，大部分样品的相似度在0.9以上，并将不同川苇分为3大类。结论该方法重复性好，简便可靠，可以为川苇的质量控制和评价提供依据。关键词：川苇；指纹图谱；高效液相
2、色谱法中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1005-5304(2014)04-0086-04川苇为伞形科植物川苇LigusticumchuanxiongHort.的干燥根茎，主要栽培于四川、云南、贵州、广西、湖北等地。川苇始载于《神农本草经》，味辛、微苦、性温，具有活血祛瘀、行气开郁、祛风止痛之功，用于血瘀气滞所致的月经不调、痛经经闭，肝郁气滞而致血行不畅的胸胁疼痛、头痛，风寒湿痹、跌打肿痛等[1-2]o现代化学和药理研究表明，川苇的活性成分主要包括挥发油类、酚酸类和生物碱类[3-4],川苇的质量和道地性均与活性成分的含量和种类紧密相关。中药质量评价一直是中药
3、研究与应用中的难点与重点问题，而建立在中药成分系统研究基础上的中药指纹图谱分析是一种综合、有效的评价手段，已成为国际公认的控制中药或天然药物质量最有效的方法之一[5-8]。为了更深入地研究并揭示川苇的质量差异，本试验对18个批次的川莒药材采用高效液相色谱法（HPLC）并结合“中药材指纹图谱相似系统”和SPSS统计软件进行分析，从而评价川苇药材的质量。1仪器与试药美国Waterse2695高效液相色谱系统，包括在线脱气机，自动进样器ProminenceSIL-20A,二极管阵列检测器Waters2998和柱温箱CT0-20A；ThermoC18（250mmX4.6mm,5u
4、m）色谱柱；AnkeTGL-16C髙速离心机（上海安亭科学仪器厂）；电子分析天平（FA1204B,上海精密科学有限公司）；恒温水浴锅（HH-2K6,巩义市予华仪器有限责任公司）。阿魏酸对照品（批号110773-200611,纯度±98%,中国药品生物制品检验所），甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），纯净水（杭州娃哈哈有限公司）。川莒对照药材（批号120927-200604,中国药品生物制品检验所）。川苇药材共18个批次，经南京中医药大学刘圣金老师鉴定为伞形科植物川苇LigusticumchuanxiongHort.的干燥根茎，密封保存于阴凉干燥处。样品来源见表lo2方法
5、与结果2.1色谱条件色谱柱：ThermoC18(4.6mmX250mm,5Pm)；流动相：甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)；梯度洗脱:10%A(0min)〜48%A(36min)〜80%A(70min)；流速：1.0mL/min；检测波长：323nm；柱温：25°C；进样量：10uLo2.2对照品溶液制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含阿魏酸328Pg的溶液，即得。2.3供试品溶液制备精密称取川莒粉末2.0g,置圆底烧瓶中，加入甲醇30mL,于70°C水浴中加热，冷凝回流提取1h,放冷，过滤,残渣同法再提取1次，过滤，合并2次滤液，水浴挥干，用甲醇溶解并
6、定容至10mL,14000r/min离心5min,吸取上清液，过0.45?m滤膜，即得。2.4方法学考察2.4.1精密度试验取"2.2”项下对照品溶液，连续进样6次，每次10uL,考察阿魏酸色谱峰保留时间和峰面积的一致性，均RSD2.6.4主成分分析根据18批川苇样品的HPLC指纹图谱11个共有峰的峰面积，选取峰面积较大的主要共有峰(分别为阿魏酸及5、6、9、10、11未知成分）作为指标，采用SPSS20.0软件对18批川苇样品进行主成分分析。以选取的6个主要成分的峰面积为数据源，所有数据经过标准化处理后，分别求得对应于2个最大特征值的主成分PCA1（阿魏酸）和PCA2（
7、未知9号共有峰），以PCA1和PCA2建立坐标系，进行投影。各样本之间的距离越远相似性越差。18批样品可分为3类：第Ib类为样品S3、S15、S5、S10、S12、S13、S14、S6、Sil、S7,第lib类为样品S9、S17、S18、S8、S16、S2、S1；第Illb类为样品S4。分类结果与聚类分析结果一致。3讨论本试验对提取溶剂甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙瞇进行考察，以甲醇提取的样品色谱峰个数较多，峰型较好,峰面积较大，故提取溶剂选择甲醇。对超声和回流两种不同提取方法进行比较，2种提取方法无明显差异，故选择回流提取
