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1、丰城鸡血藤中刺芒柄花素大鼠肠吸收探究［摘要］利用大鼠在体单向肠灌流模型，采用HPLC测定灌流液中刺芒柄花素含量，分别考察刺芒柄花素质量浓度、不同肠段以及P-糖蛋白抑制剂对刺芒柄花素肠吸收的影响，得出丰城鸡血藤中刺芒柄花素在大鼠体内的肠吸收机制。实验结果显示灌流液中刺芒柄花素质量浓度对吸收速率常数(Ka)和表观吸收系数(Papp)均无显著性影响；刺芒柄花素在小肠段(十二指肠、空肠和回肠)的Ka和Papp无显著性差异显著，但其Ka显著大于在结肠处的值(P2.2.4精密度试验精密称取刺芒柄花素对照品适量，用空白肠灌流液稀释得高、中、低(10.08,20.16,40.32mg・L-1)3个质量浓
2、度的对照品溶液，于1d中不同时间取样，测定5次试验结果计算精密度。计算得刺芒柄花素峰面积的RSD分别为3.01%,2.22%,1.93%,结果表明该方法的精密度良好。2.2.5稳定性试验分别用K氏液和空白肠灌流液配置100.80mg・L-1的刺芒柄花素溶液各3份，37°C水浴孵育6h,分别于1,2,3,4,5,6h取样，进行HPLC分析，计算刺芒柄花素峰面积的RSD分别为1.8%,1.7%,1.5%o表明在37°C水浴中放置6h,刺芒柄花素在灌流液中6h内稳定。2.2.6回收率试验精密称取刺芒柄花素对照品适量，用空白肠灌流液稀释得高、中、低(10.08,20.16,40.32mg・L-1
3、)3个质量浓度的对照品溶液，进样20uL,测定3次，根据2.2.3中回归方程得实测浓度，以实测浓度与理论浓度之比计算回收率。结果表明，刺芒柄花素高、中、低3种浓度的回收率分别为98.21%,99.01%,101.40%,结果表明该方法的回收率良好。2.3大鼠在体肠单向灌流实验2.3.1手术方法选取实验前禁食18h(自由饮水)的大鼠，腹腔注射20%乌拉坦溶液麻醉并固定，用红外灯保持37°C体温，沿腹中线打开腹腔3cm结扎胆总管，按以下方法取肠道各段，在两端剪切后插管，并用线扎紧。十二指肠段自幽门1cm处开始，空肠段自幽门15cm处开始，回肠段自盲肠上行20cm处开始，结肠自盲肠后端开始，各
4、段均取10cm。以5mL・mini流速用37°CK氏液冲洗肠管内容物至净，将伤口用浸有生理盐水的脱脂棉覆盖保湿。将大鼠肠道连接到灌流装置。2.3.2操作方法取预热至37£的供试液以0.3mL•mini流速灌流30min,平衡管路及肠段，并开始计时,进液口用已知质量的装有灌流液的小瓶灌流，出液口处用另一已知质量的小瓶收集流出液，每隔15min迅速更换一次灌流液小瓶和收集液小瓶，称重，测出刺芒柄花素的质量浓度，实验持续时间为75min(15minX5)o处死大鼠，测出肠道内径与长度。2.3.3数据处理采用重量法计算药物吸收速率常数(Ka)和表观吸收常数(Papp)oKa=(1-CoutQou
5、t/CinQin)Q/VPapp二(-Q•In(CoutQout/CinQin))/2nrl其中，Qin和Qout分别为肠段灌入的灌流液和收集液的体积(mL)(假定灌流液和收集液的质量浓度均为1.0g・mL-1),1和i•分别为灌流肠段的长度(cm)和横截面半径(cm),Q为灌流速度，Cin和Cout分别为灌流液收收集液的浓度(mg•L-l),V为灌流肠段的体积(cm3)o根据Grubbs检验法对每隔肠段获得的若干个Ka和Papp分别进行偶然误差值的取舍，取舍后必须保证至少有3个以上的Ka和Papp无显著误差，计算其平均值，即得Ka和Pappo2.4灌流液中刺芒柄花素质量浓度对药物肠吸收
6、的影响取24只大鼠随机分成4个浓度组，每组6只，以十二指肠为灌流部位，分别以含有刺芒柄花素质量浓度为1.996,9.98,49.9,100.2mg・L-1的丰城鸡血藤异黄酮提取物灌流液(均以0.5%吐温-80配制)灌流，灌流速度为0.3mL•mini,每个质量浓度的灌流液持续灌流75min,每次换液前用下一质量浓度的灌流液平衡肠段，按大鼠在体肠单向灌流实验方法操作，计算不同质量浓度刺芒柄花素在十二指肠中吸收的Ka和Papp,结果见表1。刺芒柄花素在2〜100mg•L-1的灌流液中，其在十二指肠段的Ka和Papp均无显著性差异，表明刺芒柄花素在十二指肠中的吸收在此浓度范围内不受质量浓度影响
7、。2.5灌流液中刺芒柄花素在不同肠段的吸收考察取24只大鼠随机分成4个肠段组，每组6只，均以含有刺芒柄花素质量浓度9.98mg・L-1的丰城鸡血藤异黄酮提取物灌流液（以0.5%吐温-80配制）灌流，灌流速度为0.3mL•mini,持续灌流75min,按大鼠在体肠单向灌流实验方法操作，计算刺芒柄花素在各肠段的Ka和Papp,见表2。刺芒柄花素在小肠段（十二指肠、空肠和回肠）的Ka显著大于在结肠处的值，但小肠各肠段间Ka无显著性差异；其
