用hplc法测定鸡血藤膏中芒柄花素的含量

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1、用HPLC法测定鸡血藤膏中芒柄花素的含量【摘要】目的：采用高效液相色谱测定鸡血藤中有效成分芒柄花素的含量。方法：按高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水（33：67）为流动相，检测波长250nm，柱温为35℃，流速1.0ml／min；进样量10μl，理论板数按芒柄花素峰计算应不低于5000。结果：制剂中的辅料对主药测定无干扰。芒柄花素在进样量为0.01025μg～0.5125μg(进样量10μl)范围内呈良好线性关系。精密度RSD为0.2%，供试品溶液在10小时内稳定。测得回收率平均值为98.73%,RSD为0.24%，表明方法回收率符合相关规定。结论：该法简便，迅

2、速，准确，专属性强。【关键词】鸡血藤；高效液相色谱法；含量测定；有关物质鸡血藤膏主要用于补血活血，舒筋活络，可治疗腰膝酸痛、肢体麻木、风湿麻痹、经闭、痛经、月经不调等［1］。本研究采用高效液相色谱法测定其中一个有效成分芒柄花素的含量，方法简便，迅速，准确，专属性强。1仪器、试药与实验样品高效液相色谱仪DIONEX液相色谱仪ULTIMAT3000；天平AG135和BS210S（梅特勒-托利多）；紫外分光度计UV-500（英国热电）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余所用试剂均为分析纯。芒柄花素对照品（批号：111703-200501）为中国药品生物制品检定所提供。2方法与结果2.1色谱条件与系

3、统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水（33：67）为流动相，检测波长250nm，柱温为30℃，理论板数按芒柄花素峰计算应不低于3000。2.2方法按高效液相色谱法测定（中华人民共和国药典2005年版一部附录ⅥD）。2.3对照品溶液制备取芒柄花素对照品适量，精密称定，用甲醇制成5μg/ml的溶液，即得。供试品溶液制备精密量取本品25ml，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，挥干溶剂，残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl［2］，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1ml

4、含鸡血藤以芒柄花素（C16H12O4）计，不得少于5μg。2.4鸡血藤片中芒柄花素含量测定数据，见表1。3含量测定方法学考察3.1方法依据按中华人民共和国药典2005年版一部附录ⅥD。3.2方法学考察3.2.1光谱扫描及检测波长的确定取芒柄花素对照品适量，用甲醇制成对照品溶液［3］，在紫外可见分光光度计上于200～400nm扫描，最大吸收波长为250.0nm。3.2.2提取方法考察乙酸乙酯提取次数考察：分别取本品25ml,同正文方法提取，分别用乙酸乙酯提取3次，4次，5次，6次，比较峰面积，结果见表2。表1三厂家鸡血藤片中芒柄花素含量表2萃取次数与峰面积结果表明，用乙酸乙酯提取5次可提取

5、完全。3.2.3干扰试验供试品溶液制备：精密量取本品25ml，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，挥干溶剂，残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。对照品溶液制备：取芒柄花素对照品适量，精密称定，用甲醇制成5.125μg/ml的溶液，即得。阴性对照溶液制备：取缺鸡血藤的阴性对照样品，照供试品溶液制备方法制备，即得。吸取上述三种溶液各10ul，按含量测定方法进行测定，结果在阴性对照溶液色谱图中，在芒柄花素峰位置处无干扰色谱峰，见图1～3。3.2.4线性关系取芒柄花素对照品适量，加甲醇制成系列浓度对照品溶液（μg/ml：1.025、2.

6、05、5.125、10.25、20.5、25.625、51.25）。照含量测定项下测定峰面积［4］，测定数据见表3。以芒柄花素浓度对峰面积进行线性回归，得回归方程：Y=1.04X-0.401，r=1.000，芒柄花素在进样量为0.01025μg～0.5125μg(进样量10μl)范围内呈良好线性关系。见图4。3.2.5稳定性试验取供试品溶液（批号：200608001），照供试品制备方法供试品溶液。按含量测定项下方法在0小时、1小时、2小时、3小时、5小时、8小时、10小时进样进行峰面积测定［5］，见表4。测定结果RSD为0.2%，供试品溶液在10小时内稳定。3.2.6重复性试验对同一批鸡

7、血藤膏（批号：李时珍药业200608001），取6份，照含量测定方法进行测定，见表5。结果表明，该方法重现性良好。范围选取低限40%处做重现性和回收测定(样品：武汉中联药业050600取样20ml），结果见表6。选取限度的1倍处做重现性和回收率测定（样品：武汉中联药业050600，取样80ml），结果见表7。3.2.7回收率试验取已知芒柄花素含量的鸡血藤膏（批号：李时珍药业200608001，含量为1.481ug/ml）6份，每份2