乳鼠皮层神经元原代培养改良方法及基本电生理特性探究

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1、乳鼠皮层神经元原代培养改良方法及基本电生理特性探究摘要：目的：对原有乳鼠大鼠皮层神经元的原代培养方法进行改进，获得高质量且体外存活时间更长的神经元，以期应用于对细胞功能状态要求高的相关研究。方法：多聚赖氨酸预处理培养皿，分离出生24h之内的SD大鼠大脑皮层神经元，采用机械吹打与胰蛋白酶化学消化相结合的方法制备单细胞悬液，经计数后以1X105/mL的细胞密度接种。24h后加阿糖胞昔(3Hg/mL)以抑制非神经细胞过度增殖。培养3d后将培养液全量换为添加B27的培养液。用倒置相差显微镜观察细胞形态，并用膜片钳单通道记录法记录BKCa通道电流。结果：对原有培养方法改进后获得可长期存活的

2、形态典型神经元。在培养36d时，用膜片钳单通道记录法仍能记录到正常的BKCa通道电流。结论：该培养方法简单，经济，结果稳定，可作为体外原代培养乳鼠神经元的良好实验模型。关键词：原代培养；皮层神经元；乳鼠；膜片钳；BKCa通道电流中图分类号：G8042文献标识码：A文章编号：1007-3612(2012)10-0042-05AModifiedMethodforPrimaryCultureofNewbornRatCorticalNeuronsandItsBasicElectrophysiologicalPropertyZHAOLi,CHENYao,GONGLijing,LUYuany

3、uan(BeijingSportUniversity,Beijing100084,China)Abstract：Objective：Tomodifypreviousmethodofprimarynewbornratcorticalneuronculturetogetpurerandmorelonglastingcellsforsomerelatedstudies.Methods:Thecerebralcorticeswereasepticallyremovedfrom024holdSDratsanddissectedout.Mechanicaldissociationandtry

4、psindigestionwerecombinedtoconductmonocellsuspendingmedia.Thedissociatedmomocorticalcellsweredilutedto1X105/mlthentobeplatedonpolyLlysinecoatedpetridish.After24hculture,3ug/mLcytosinearabinoside(AraC)wasaddedtotheculturefor24htoinhibittheoutgrowthofglialcells.Afterthreedayspostplanted,allmedi

5、awereremovedfromculturesandreplacedwithmediumsupplementedwithB27.Thenhalfoftheculturemediumwaschangedeverythreedays.Themorphologicalchangesofneuroncellswereobservedbylightmicroscope.Immunostainingofmicrotubuleassociatedprotein2(MAP2)wasappliedtoassesstheculturepurity・Singlechannelcurrentwasre

6、cordedtoevaluatetheneuronspropertiesbyusingpatchclamptechnique・Results:Theimprovedmethodcouldincreasethecellslifetime・Onthe36thday,theprimaryculturewascharacterizedbynormalmorphologyandwasgainedtypicalBKcacurrent・Conclusion：Thisisasimpleandreliabletechniquefortheinvitroprimarycultureofratcort

7、icalneuronswhichhavelongtimelivabilityandnormalelectrophysiologicalproperty.Keywords:primaryculture,corticalneurons,newbornrat，patchclamp,BKcacurrent原代培养神经细胞的生长发育特征与在体神经元非常相似，且具有样本均一性高，实验条件可控、相对恒定，影响因素单一，可有效排除诸多复杂因素（如体内循环、体液、内分泌、血脑屏障）等优点，日益成为