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1、UPLC—MS/MS测定青蒿素代谢抑制剂猫眼草黄素和大鼠血浆药代动力学探究［摘要］目的：建立UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中青蒿素代谢抑制剂猫眼草黄素(chrysosplenetin,CHR)的体内分析方法，并考察其药代动力学参数。方法：血浆样品以乙月青沉淀蛋白；采用Shim-packXR-ODSC18色谱柱(2.0mmX100mm,2.2um),以地西泮为内标，流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(87:13)；质谱条件为电喷雾离子源(ESI源)，正离子模式检测；样品分析时间为2mine结果：CHR在5〜5000ug・L-l线性良好(r=0.9993),提取回收率为69.
2、0%〜81.2%,日内、日间精密度和准确度符合要求°CHR口服吸收差，存在双峰甚至多峰现象；静脉注射消除半衰期短，低、中、高剂量组tl/2分别为(17.01±8.06),(24.62±4.59),(28.46±4.63)min。结论：该方法特异、快速、灵敏，可用于CHR药代动力学分析。［关键词1UPLC-MS/MS；猫眼草黄素；药代动力学；血浆;大鼠猫眼草黄素(chrysosplenetin,CHR)是一种多甲氧基黄酮，广泛存在于黄花蒿［1-2］、泽漆(俗称猫眼草)、岩筋菜、细花线纹香茶菜［3］等多种植物中。研究人员［4］发现CHR对手足口病主要病原体肠道病毒71(EV7
3、1)具有较强的抑制活性，能有效抑制病毒RNA的合成，且对多种人肠道病毒都表现出相似的抑制活性。此外，文献还报道［5］黄花蒿叶片中的多甲氧基黄酮如CHR、紫花牡荆素等可显著提高青蒿素的抗疟活性；本课题组也发现CHR可通过显著抑制与青蒿素代谢相关的CYP450酶亚型的活性，从而提高青蒿素的体内抗疟活性，确定了青蒿素-CHR复配抗疟比例为1：2,显现出良好的青蒿素肝代谢抑制剂的开发前景。但CHR的溶解性极差，其药代动力学过程可能存在着难溶性药物共有的特点和缺陷，本实验旨在建立简单、快速、可靠的UPLC-MS/MS,以评价CHR在大鼠体内的药代动力学过程，为青蒿素代谢抑制剂CHR
4、的进一步开发利用奠定基础。1材料超高效液相色谱仪（日本岛津公司NexeraUHPLCLC-30A型），质谱（美国AE公司API4000型液相色谱串联质谱联用仪），配有电喷雾离子化源（ESI）和AnaLyst1.5.1分析操作软件；低温高速离心机（Z323K型，德国HERMLER公司）；分析天平（AE240型，瑞士MettLer-ToLedo公司）。CHR（纯度398%,由本实验室制备），地西泮（中国食品药品检定研究院，批号115-9302）,乙睛、甲醇、甲酸均为色谱纯，Fisher公司；去离子水（Milipore）。SD大鼠，30只，雌雄各半，体重（210±20）g,由宁
5、夏医科大学实验动物中心提供。2方法2.1对照品溶液配制CHR标准溶液的配制：精密称取CHR对照品10mg,置10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成1g•L-1的储备液I,以流动相甲醇为稀释溶液，逐步将储备液I稀释成50mg・L-1的储备液II10mL,置于4°C冰箱内保存待用。内标地西泮溶液配制：精密称取地西泮10mg置于10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成lg・L-1的储备液III,以流动相甲醇为稀释液，逐步将储备液III稀释成为20ng・L-1的地西泮溶液10mL,放置4°C冰箱内保存待用。2.2色谱条件Shim-packXR-ODSC18
6、色谱柱(2.0mmX100mm,2.2Liin),ODSC18保护柱(2mmX5mm,2.2um),流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液(87:13),柱温30°C,流速0.3mL•min-1,进样量10uL。2.3质谱条件离子化源为ESI源，电喷雾电压为4kV,离子检测方式为正离子检测，碰撞气压力为1.73X10-2Pa,喷雾压力为36V,加热温度为500°C,所用气体为氮气。CHR的m/z[M+HJ+375.5,定量离子m/z317.2；地西泮(内标)m/z[M+Hl+316.2,定量离子m/z为163.0,见图1。2.4血浆样品的处理精密吸取血浆100uL,置10mL具塞
7、玻璃离心管中，精密加入地西泮(20Pg-L-1)20uL,涡旋振荡30s,加入0.3mL的乙月青，涡旋振动3min,14000r•min-1,低温离心10min,吸取上清液，取10uL进样分析。2.5方法学考察2.5.1血浆标准曲线的制备取CHR储备液II以大鼠空白血浆为稀释溶液，配制成相当于血药质量浓度为5000,1000,500,100,50,20,10,5ug-L-1的CHR血浆溶液,分别以2.4项下操作，进行UPLC-MS/MS分析测定，以CHR浓度为横坐标，CHR与内标峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。2.5.2定量下
