医学毕业论文人截短型凋亡诱导因子对hela细胞的促凋亡作用

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1、XX大学毕业论文人截短型凋亡诱导因子对HeLa细胞的促凋亡作用2014年6月25日作者：张巍，张勇，孟艳玲，温伟红，薛茜，任君琳，杨安钢【关键词】凋亡诱导因子；,HcLa细胞；，细胞凋亡ProapoptoticactivityoftruncatedhumanapoptosisinducingfactoronHeLacells【Abstract]AIM:Toobservetheexpressionoftruncatedhumanapoptosisinducingfactor(AIF)geneanditseffectonHeLacells.METHODS:AfterAIFA1・120gene

2、wassuccessfullycloned,theshortertruncatedhumanAIFgene(AIFA1-400)wasconstructedbydeletingtheNterminalmitochondriallocalizationsequence(MLS),thecodingsequenceofflavineadeninedinucleotide(FAD)bindingdomainandnicotinamideadeninedinucleotide(NADH)bindingdomainofAIFprotein.ThetmneatedhumanAIFgene(AIFA1

3、-400)wasinsertedintothepIRES2EGFPandpcDNA3eukaryoticexpressionvectors,andthecoexpressionvectorswerethentransfectedintoHeLacellswithLipofectAMINE-TheexpressionofthetruncatedAIFgeneanditseffectonHeLacellsweredetectedbyfluorescencemicroscopeanalysisandMTTtest.RESULTS:Theeukaryoticexpressionvectorcon

4、tainingthetruncatedhumanAIF(AIF△1-400)genewassuccessfullyconstructed.TheAIFproteincouldbedetectedinthetransfectedHeLacells.Aftertransfection,typicalcellapoptoticchangeswereobservedunderanelectronmicroscope.MTTtestshowedthattheproliferationofHeLacellswassignificantlyinhibited.CONCLUSION:Theexpress

5、ionofthetruncatedhumanAIF(AIFAl-400)genecaninducetheapoptosisofthetransfectedhumanHeLacells・[Keywords]apoptosisinducingfactor;HeLacells;apoptosis【摘要】Fl的：观察人截短型凋亡诱导因子(AIFA1-400)对HeLa细胞的促凋亡作用.方法：在AIFA1-120基因克隆成功的基础上进一步改造，构建截去AIF基因线粒体定位信号,FAD结合结构域和NADH结合结构域（1-400位氨基酸）编码序列的AIFA1-400基因，将其克隆入pcDNA3和pIR

6、ES2EGFP真核表达载体，用脂质体法转染HeLa细胞，通过荧光显微镜观察,MTT检测等方法检测该基因在转染细胞中的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性.结果：经酶切鉴定与测序证实，带有AIFA1-400的真核表达载体构建成功•瞬时转染后岀现细胞形态变化，随转染时间的延长转染细胞数减少，荧光变弱.经间接免疫荧光检测可观察到截短型AIF蛋白位于细胞质中，部分已位于细胞核内.MTT法检测发现AIFA1-400转染后对细胞牛长有明显的抑制作用.结论：AIFA1-400仍然具有诱导HeLa细胞凋亡的作用.【关键词】凋亡诱导因子；HeLa细胞；细胞凋亡0引言凋亡诱导因子（apoptosisinducin

7、gfactor,AIF）是1996年发现的一种凋亡诱导蛋片，全长为613个氨基酸（aa）,成熟的AIF分子为559个aa,由3部分构成：1个FAD结合结构域（122〜262aa和400〜477aa）,1个NADH结合结构域（263〜399aa）和1个C末端结构域（478〜610aa）.在细胞中表达后定位于线粒体膜间隙中［1］.当凋亡信号刺激时可检测到AIF分子从线粒体释放到细胞质，然后转位到细胞核内，直接介导细胞核发生凋亡［2-4］