医学毕业论文人抗hbsag单链抗体

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1、XX大学毕业论文人抗HBsAz单链抗体2014年6月25日人抗HBsAg单链抗体作者:孟艳玲，温伟红，薛茜，贾林涛，鲍炜，刘家云，任君琳，薛采芳，李英辉，王成济，杨安钢【关键词】肝炎表而抗原GeneconstructionandexpressionofhumanantiHBsAgsinglechainFvTatfusionproteininE.coli[Abstract]AIM:ToconstructafusiongeneofhumanantiHBsAgScFvTatandtoanalyzethebindingactivityandinternalizationofScFvTa

2、tfusionproteinafteritsexpressioninE.coli.METHODS:TwooligonucleotideprimersweredesignedandusedtoamplifytheScFvgene.TheconstructionwasclonedintoexpressionvectorpTATHAcontainingtheproteintransductiondomainTat.TheexpressedproteinwasdetectedbySDSPAGEandWesternblotandpurifiedbyaffinitychromatograp

3、hy.ThebindingspecificityoftheScFvTatfusionproteinwasconfirmedbyindirectELISAandspecificinternalizationoftheScFvTatfusionproteinwasconfirmedbyimmunocytochemistrystainingafterthepurifiedproteinwasincubatedwithHBsAgpositiveornegativehepatocellularcarcinomacells・RESULTS:Restrictionendonucleasedi

4、gestionandDNAsequencingprovedthatScFvgenewascorrectlyclonedintoexpressionvector.SDSPAGEandWesternblotanalysisshowedthatScFvTatfusionproteinwassuccessfullyexpressedinE.coliBL21.IndirectELISAandcompetitioninhibitionELISAconfirmedthattheexpressionproductshadantigenspecificbindingactivity.ScFvTa

5、tfusionproteinwasspecificallyinternalizedintoHBsAgpositivehepatocellularcarcinomacells.CONCLUSION:TheantiHBsAgScFvTatfusionproteinexpressedinE・colicanspecificallyinternalizeintoHBsAgpositivehepatocellularcarcinomacells.【Keywords】singlechainantibody;hepatitisBsurfaceantigens;internalization;g

6、enes,Tat【摘要】目的：构建人抗HBsAg单链抗体Tat蛋白转导结构域(ScFvTat)融合基因，在大肠杆菌中进行表达，并分析ScFvTat融合蛋白的活性及内化情况.方法：设计引物扩增人抗HBsAg单链抗体基因，克隆入含有蛋白转导结构域Tat序列的原核表达载体pTATHA,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导融合蛋白表达.表达产物用SDSPAGE及Westernblot鉴定，用亲和层析柱纯化.间接ELISA和ELISA竞争抑制实验分析ScFvTat融合蛋白的亲和活性，将纯化蛋白与HBsAg阳性或阴性肝癌细胞共孵育后，免疫细胞化学染色分析ScFvTat融合蛋白的结合及

7、内化情况.结果：成功地构建了人抗HBsAg单链抗体Tat融合蛋白的原核表达载体，在IPTG诱导下获得了表达，表达的ScFvTat融合蛋白具有与HBsAg结合的活性，并且能够特异性内化入HBsAg阳性肝癌细胞.结论：单链抗体与Tat蛋白转导结构域融合后，实现了ScFvTat融合蛋白的特异性内化，为该单链抗体的进一步应用奠定了基础.【关键词】单链抗体；肝炎表面抗原，乙型；内化；基因，Tat0引言单链抗体(SeFv)及其与效应分子的融合体能否高效地内化入细胞对于其应用非常关键.Tat是新近发现的一