资源描述：
《二苯乙烯苷对h2o2导致的大鼠海马神经元氧化损伤的保护作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、二苯乙烯昔对H2O2导致的大鼠海马神经元氧化损伤的保护作用研究辽宁省屮医院110032摘要：目的：探讨二苯乙烯背(TSG)对H2O2导致大鼠海马神经元氧化损伤的保护作用及机制。方法：将培养9d的大鼠海马神经元随机分为正常组、模型组、给药组(10,50,100μmol·L-lTSG)OIE常组不做任何处理，模型组给予50μmol·L-lH2O2,作用24h；给药组在给予H2O2前24h加入不同浓度的TSG；CCK-8法检测各组海马神经元的存活能力；硫代巴比妥酸
2、检测丙二醛含量；黄卩票吟氧化酶法检测超氧化物歧化酶活性；RT・PCR法检测各组海马神经元屮CREB和BDNFmRNA的表达。结果：给药组大鼠海马神经元的存活能力和SOD活性较模型组显著增强(P<0・01)；MDA含量显著降低(P&t;0.01)；CREB和BDNFmRNA的表达明显升高(P<0.01)o结论：TSG对H2O2诱导的大鼠海马神经元氧化损伤有明显的神经保护作用，这可能与激活了CREB/BDNF通路有关。关键词：H2O2；神经元氧化损伤;研究屮图分类号：R285.5文献标识码
3、：A1材料与方法1.1试剂二苯乙烯廿购自中国药品检验院，溶于聚乙二醇-400(天津科密欧)配成各浓度待用。DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium,Gibco公司)，胎牛血清(fetalcalfserum,FBS,Gibco公司)，青■链霉素(penicillin-strepotomycin,P/S,Thermo公司)，H2O2(上海桃浦化学试剂公司)；一抗为兔抗NF・M(北京博奥森)；二抗为Cy3标记驴抗兔IgG(北京博奥森)，DAPI染色液(碧云天)，CellCou
4、ntingKitCCK-8试剂盒(Dojindo),丙二醛(MDA)测试盒(南京建成生物工程研究所)，超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)，RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(Thermo),PCRMasterMixKit(Thermo)。1.2仪器倒置荧光生物显微镜（FM-500,上海普丹），C02培养箱（SCO2W-2,SCO2W-2）,PCR仪（MG96G,杭州朗基），凝胶成像系统（2500R,上海天能），紫外可见分光光度计（
5、UV9100,邢台润联），酶标仪（dnm-9602a,邢台润联）1.3动物SD雄性大鼠体重（200±20）g,购自辽宁长生生物技术有限公司，合格证号:SCXK（辽）2010-001,光明：黑暗=1:1,室温（22±2）°C,相对湿度55%~65%。喂养1周稳定后用于实验。1.4大鼠海马神经元的分离与培养取各组大鼠大脑并分离出海马，剪碎并用0.25%胰蛋白酶于37°C消化15min,终止消化后经筛网过滤，得到细胞悬液。细胞悬液以5×109·
6、;L-l的密度接种于经多聚赖氨酸包被过的24孔板中，加入含有10%FBS和1%P/S的DMEM高糖培养基，置于37°C,5%CO2-95%空气培养箱中培养c3~4d后加入3μmol·L・l的阿糖胞井,Id后更换新的培养基，以后每3d半量换液。培养9d后用兔抗NF・M抗体进行免疫荧光染色，并在倒置荧光显微镜下进行观察[l]o1.5造模与分组将原代培养的神经元随机分为3组:正常组,造模组（培养基中加入50μmol·L-lH2O2,作用24h）,给药组（在
7、加入50μmol·L-lH2O2前给予10,50,100μmol·L-1TSG,作用24h）o1.6CCK-8检测细胞的活力将神经元以5×109·L-l的密度接种于经多聚赖氨酸包被过的96孔板中，并以上述分组每组设3个复孔。培养到9d后,每孔加入:L0μLCCK-8溶液,37°C孵育4h,并在450nm处检测吸光度。重复3次。1.7MDA含量和SOD活性的测定脂质过氧化的降解产物之一的MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成
8、红色产物，在532nm处惊醒比色测定来检测MDA相对含量变化；黄嚓吟氧化酶反应体系产生超氧阴离子自由基，并经氧化轻胺形成亚硝酸盐，在显色剂作用下呈红色，并用分光光度计检测吸光度来计算样品中SOD活性。将海马神经元以5×109·L-l的密度接种于经多聚赖氨酸包被过的96孔板中，并以上述分组每组设3个复孔。培养到9d后，按照试剂盒说明书所述方法检测MDA含量和SOD活性。重复3次。1.8RT-PCR检测CREB/BDNF通路相关基因的表达将各组海马神经元置于含
