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《肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子体外氧化损伤的保护作用研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子体外氧化损伤的保护作用研究论文李刚，朱文斌，牛飞，张宏利【摘要】目的观察肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子膜结构和氧化损伤的干预作用,探讨肉苁蓉苯乙醇苷治疗弱精子症男性不育的作用机制。方法取大鼠精子制备精子悬液，并分为正常组,药物空白组，模型组,阳性药对照组(维生素C组)和肉苁蓉苯乙醇苷提物小、中、大剂量组,应用FeSO4／H2O2体系产生活性氧(ROS),在有氧环境下,不同剂量(0.025,0.25,0.5g/ml生药量)的肉苁蓉苯乙醇苷与精子悬液共同孵育后,检测精子膜脂质过氧化损伤程度,
2、通过精子低渗膨胀试验评估精子膜功能,并与已知的抗氧化剂维生素C对照。结果肉苁蓉苯乙醇苷小、中、大剂量组(0.025,0.25,.freell-1)在相同的条件下均可提高精子悬液SOD活力,降低MDA含量,对精子膜功能具有一定的保护作用。其中0.25,0.5g·ml-1的肉苁蓉苯乙醇苷组明显优于维生素C组(P0.01或P0.001)。结论肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子膜的脂质过氧化损伤具有明显的干预作用,对精子膜结构和功能具有明显的保护作用。【关键词】肉苁蓉；苯乙醇苷；精子；脂质过氧化肉苁蓉作为一种名贵的中药材，
3、近年来对它的研究较多。肉苁蓉的活性成分主要包括苯乙醇苷类化合物（Phenylethanoidglycosides，PhGs）、肉苁蓉多糖、甜菜碱、黄酮等物质.freel×20cm），旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂），大孔吸附树脂，玻璃容器若干，高速台式离心机,水浴锅，二氧化碳细胞培养箱（SANYO）,酶标仪，血球计数板。SOD试剂盒、MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所），低渗膨胀液:柠檬酸钠0.735g,果糖1.351g,双蒸水100ml。伊红Y溶液:伊红Y0.5g,溶于等渗生理盐水100ml。雄性DA)含
4、量测定精子悬液孵育2h,按试剂盒说明书操作,用分光光度计测定。波长532nm处比色。精子膜脂质过氧化损伤的程度以MDA的产量来表示(nmol/107个精子)。MDA量(nmol/107个精子)=(A样品-A空白)÷(A标准-A空白)×对照品浓度(10nmol·ml-1)×样品稀释倍数。2.6精子存活率测定精子悬液经温育30min和90min后分别取5μl与等量的曙红-Y混匀，室温下放置2min，加盖玻片，在明视野400×显微镜下15min内观察，死精子被染色呈粉红色，活精子不被染色而胞质透明。每份标本计数
5、200个精子计算存活率。2.7精子低渗膨胀实验(HOS)取低渗肿胀试剂1ml，37℃预温5min，分别加入处理过的精液100μl混匀，37℃水浴孵育30min，取5μl精子悬液于精子计数盘中，计算200个精子中b-g型肿胀精子的百分率。3结果3.1肉苁蓉苯乙醇苷定性鉴定采用薄层层析法对肉苁蓉中PhGs定性分析，正丁醇-乙酸-水（5∶4∶1）为展开剂，展开晾干后，喷以氯化铁-乙醇显色剂。PhGs含有酚羟基，会与Fe3+发生反应显紫色。测得Rf值0.24和0.78较明显，与文献松果菊柑和麦角甾苷0.23和0.
6、73基本吻合。3.2肉苁蓉PhGs对于大鼠精子氧化损伤后对精子存活率的影响精子悬液孵育30min后各组的精子存活率由于实验条件的原因，存活率均有降低。维生素C组和肉苁蓉提取物小、中、大剂量组的精子存活率显著高于模型组(P0.001);30min和90min的精子活率,0.025g·ml-1肉苁蓉提取物组与维生素C组无明显差异,0.25和0.5g·ml-1肉苁蓉提取物组的精子存活率显著高于维生素C组(P0.01或P0.001)；90min后精子存活率进一步降低,0.5g·ml-1肉苁蓉提取物组的精子存活率保
7、持在较高水平,与正常组相比无显著差异(见表1)。表1各组30,90min精子存活率（略）3.3对精子尾部低渗膨胀试验的影响低渗膨胀试验通过低渗溶液来检测精子尾部细胞膜的状况，从而了解其运动机能的实验方法。g型精子尾部全部膨胀，表示细胞膜无损，机能良好。在精子低渗膨胀率试验中，模型组显著低于正常组(P0.001)。其中，精子的总膨胀率(b-g型)［7，8］：肉苁蓉提取物小剂量组与维生素C组相比无显著性差异，中、大剂量组显著高于维生素C组（P0.001），甚至接近正常组；对于g型精子膨胀率影响，0.025g·
8、ml-1肉苁蓉提取物组与维生素C组(0.25mg·ml-1)相比无显著性差异,但中、大剂量肉苁蓉提取物组显著优于维生素C组(P0.01)。见表2。表2各组精子尾部低渗膨胀实验结果（略）3.4肉苁蓉PhGs对于大鼠精子氧化损伤后T-SOD活力、MDA含量的影响精子悬液孵育0.5h后,模型组的T-SOD活力显著低于正常组(P0.001),MDA量显著高于正常组(P0.001);维生素C组和肉苁蓉提取物小、中、大剂量组的T-SOD活
