琐琐葡萄多糖对大鼠体外免疫性肝损伤保护作用的研究论文

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1、琐琐葡萄多糖对大鼠体外免疫性肝损伤保护作用的研究论文刘涛马龙赵军苏德奇【摘要】目的研究琐琐葡萄多糖（VVP）在体外对大鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法采用热水提取、乙醇沉淀，Sevage法除蛋白、透析分离纯化提取VVP，苯酚硫酸法测定多糖含量。采用BCG整体致敏，LPS离体攻击法建立大鼠原代肝细胞免疫损伤模型，取细胞上清液测定其ALT，AST活性和NO含量。结果琐琐葡萄中多糖含量为8.19％；VVP5，20，80μg/ml均可程度不同地使BCG+LPS损伤后升高的大鼠肝细胞上清ALT.freelVitisvinifer

2、alonimmunologicalliverinjurymodelinvitro.MethodsVitisamurensisPolysaccharideetryineitscontent.TheimmunologicalhepatotoxicitymodeletteGuerin(BCG)pluslipopolysaccharides(LPS)invitro.Thesupernatantofcellsafter3～24hincubationationofALT,ASTandNOrespectively.ResultsT

3、hecontentofpolysaccharideinVitisamurensisentl)indifferentdoses.TheeffectsofVVPmentionedaboveilartothoseofthestandarddrug,DinmmoniumGlycyrrhizinate(Grz).ConclusionVitisviniferalpolysaccharideshomunologicalliverdamageinducedbyBCGplusLPSinvitro.Keymunologicalliver

4、injury琐琐葡萄为葡萄科葡萄属植物琐琐葡萄VitisviniferalL.的成熟果实，主产于新疆吐鲁番、和田、鄯善等地，是维吾尔医习用的一种药食兼用植物，药用果实，具有健脾胃、理肺、生津、养血等作用。维医用于治疗脾胃不和、神志不安等，民间用于小儿麻疹、肝炎等症［1］。琐琐葡萄中除含有大量的葡萄糖、果糖、维生素、氨基酸等营养成分外，还有鞣质类、黄酮、萜类、多糖等多种生物活性物质［2～4］。研究表明多糖（polysaccharides）具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、降血脂、抗衰老、抗辐射等多方面的药理作用［5］，是近

5、年来天然药物研究的热点课题之一。为探讨多糖与琐琐葡萄抗病毒免疫调节活性的相互关系，本研究采用热水提取、乙醇沉淀，Sevage法除蛋白、透析分离纯化提取了琐琐葡萄多糖（VVP），苯酚硫酸法测定多糖含量，并采用BCG整体致敏，LPS离体攻击法建立大鼠原代肝细胞免疫损伤模型，探讨了VVP在体外对大鼠免疫性肝损伤的保护作用。1器材1.1动物SD大鼠，雄性，体重（200±20）g，新疆医科大学实验动物中心提供（SPF级，动物使用许可证号：SYXK［新］2003-0001）。1.2药材琐琐葡萄购自新疆维吾尔自治区吐鲁番维药市场，

6、经专家鉴定为VitisviniferalL.的果实。1.3仪器与试剂UV2501PC型双光束紫外分光光度计（日本岛津）；SaBa18AMS全自动生化分析仪（Roma-Italy）；Forma二氧化碳培养箱；XD711型酶标仪（上海迅达医疗器械有限公司）；DZK88-A型电热恒温真空干燥箱(上海医疗器械七厂)；CQ-50型超声波清洗器(上海超声波仪器厂)；METTLERTOLEDOAB104-N型分析天平(Mettler-ToledoInstr.shanghaiLtd)。甘立欣（Grz，江苏正大天晴药业股份有限公司，批

7、号060808）；Ⅳ型胶原酶、LPS（Ecoli0555:B5）（Sigma公司）；DMEM培养基（GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司，批号061205）；卡介苗（BCG，上海生物制品检定所，批号0601001）；谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司），N-萘基-乙烯二胺、对氨基苯磺酰胺（Fluka进口分装）。其余试剂均为国产分析纯。2方法2.1VVP的提取及含量测定琐琐葡萄药材300g，粉碎，过40目筛，加10倍体积的水回流提取3次，3h/次，提取液

8、合并后减压浓缩至适量，再加入5倍体积的95%乙醇，静置过夜。抽滤，沉淀经无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，置60℃真空干燥箱中干燥，得粗多糖。将粗多糖溶于水，以Sevage法除蛋白，透析，透析液中加入5倍体积的95%乙醇，静置过夜，抽滤，所得沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤数次，置60℃真空干燥箱中干燥，即得精制多糖。以半乳糖为对照品，采用苯酚-硫酸法［