资源描述：
《肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子体外氧化损伤的保护作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子体外氧化损伤的保护作用研究：李刚，朱文斌，牛飞，张宏利【摘要】 目的观察肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子膜结构和氧化损伤的干预作用,探讨肉苁蓉苯乙醇苷治疗弱精子症男性不育的作用机制。方法取大鼠精子制备精子悬液，并分为正常组,药物空白组，模型组,阳性药对照组(维生素C组)和肉苁蓉苯乙醇苷提物小、中、大剂量组,应用FeSO4／H2O2体系产生活性氧(ROS),在有氧环境下,不同剂量(0.025,0.25,0.5g/ml生药量)的肉苁蓉苯乙醇苷与精子悬液共同孵育后,检测精子膜脂质过氧化
2、损伤程度,通过精子低渗膨胀试验评估精子膜功能,并与已知的抗氧化剂维生素C对照。结果肉苁蓉苯乙醇苷小、中、大剂量组(0.025,0.25,0.5g·ml-1)在相同的条件下均可提高精子悬液SOD活力,降低MDA含量,对精子膜功能具有一定的保护作用。其中0.25,0.5g·ml-1的肉苁蓉苯乙醇苷组明显优于维生素C组(P<0.01或P<0.001)。结论肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子膜的脂质过氧化损伤具有明显的干预作用,对精子膜结构和功能具有明显的保护作用。【关键词】肉苁蓉；苯乙醇苷；精子；脂质
3、过氧化 肉苁蓉作为一种名贵的中药材，近年来对它的研究较多。肉苁蓉的活性成分主要包括苯乙醇苷类化合物（Phenylethanoidglycosides，PhGs）、肉苁蓉多糖、甜菜碱、黄酮等物质，其中PhGs是肉苁蓉中最为重要的活性成分之一。 PhGs是一类含有羟基、甲氧基取代苯乙基和羟基、甲氧基取代肉桂酰基的化合物,通常以β-葡萄糖为母核的含有酯键及氧苷键的天然糖苷,广泛存在于双子叶植物中。苯乙醇苷类化合物主要由咖啡酸、苯乙醇苷元和糖三部分组成,包括海胆苷(Echinacoside)、麦角甾苷
4、(Acteoside)、异麦角甾苷(Isoacteoside)、2-乙酰基麦角甾苷(2′-acetylacteoside)等。许多研究结果表明,苯乙醇苷类化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、增强记忆及性机能等作用。由于PhGs分子含有多个酚羟基，能够结合体内自由基，避免其在体内的大量蓄积，保护机体免受过量氧化损伤，是抗氧化和抗衰老的主要成分［1］。 尽管肉苁蓉以复方形式多次出现在治疗男性少精、弱精疾病的中药配伍中［2］，但就其所发挥作用的机理研究尚不全面。除去其可呈现出的雄性
5、激素和促性腺激素样作用进而提高精子数量和活力的作用外［3］，研究其抗氧化功效在治疗弱精、少精疾病中所做贡献还是新的尝试。本文以肉苁蓉提取物对大鼠精子体外膜功能氧化损伤的保护作用为题，体外应用FeSO4／H2O2体系建立氧化应激损伤［4］，探讨肉苁蓉抗氧化功效在治疗这类疾病中所发挥的作用。 1材料 干燥管花肉苁蓉肉质茎（购自内蒙古中蒙医院）。电子天平PL2002，自制色谱柱（1.5cm×20cm），旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂），大孔吸附树脂，玻璃容器若干，高速台式离心机,水浴锅，二氧化碳细胞培养
6、箱（SANYO）,酶标仪，血球计数板。SOD试剂盒、MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所），低渗膨胀液:柠檬酸钠0.735g,果糖1.351g,双蒸水100ml。伊红Y溶液:伊红Y0.5g,溶于等渗生理盐水100ml。雄性DA)含量测定精子悬液孵育2h,按试剂盒说明书操作,用分光光度计测定。波长532nm处比色。精子膜脂质过氧化损伤的程度以MDA的产量来表示(nmol/107个精子)。MDA量(nmol/107个精子)=(A样品-A空白)÷(A标准-A空白)×对照品浓度(10nmol·ml-1)×
7、样品稀释倍数。 2.6精子存活率测定精子悬液经温育30min和90min后分别取5μl与等量的曙红-Y混匀，室温下放置2min，加盖玻片，在明视野400×显微镜下15min内观察，死精子被染色呈粉红色，活精子不被染色而胞质透明。每份标本计数200个精子计算存活率。 2.7精子低渗膨胀实验(HOS)取低渗肿胀试剂1ml，37℃预温5min，分别加入处理过的精液100μl混匀，37℃水浴孵育30min，取5μl精子悬液于精子计数盘中，计算200个精子中b-g型肿胀精子的百分率。 3.2肉苁蓉Ph
8、Gs对于大鼠精子氧化损伤后对精子存活率的影响精子悬液孵育30min后各组的精子存活率由于实验条件的原因，存活率均有降低。维生素C组和肉苁蓉提取物小、中、大剂量组的精子存活率显著高于模型组(P<0.001);30min和90min的精子活率,0.025g·ml-1肉苁蓉提取物组与维生素C组无明显差异,0.25和0.5g·ml-1肉苁蓉提取物组的精子存活率显著高于维生素C组(P<0.01或P<0.001)；90min后精子存活率进一步降低,0.5g·ml-1肉苁蓉提取
