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《trps1调控胆管上皮细胞上皮-间质转化的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、Trps1调控胆管上皮细胞上皮-间质转化的实验研究程哲，田驹，郑树国（400038重庆，第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所）[摘要]目的观察体外模拟冷保存再灌注损伤（coldpreservationreperfusioninjury，CPRI）诱导人肝内胆管上皮细胞（humanintrahepaticbiliaryepithelialcells，HIBECs）发生上皮-间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）的现象，并探讨毛发鼻指（趾）综合征1型相关基因（tricho-rhino-ph
2、aryngealsyndrometype1，Trps1）在该过程中的作用。方法先将HIBECs置于4℃UW液中缺氧保存12、24、48h后，再转移至37℃正常含血清培养基中孵育1h，分别模拟CPRI冷保存和再灌注两个阶段，PCR及Westernblot检测上皮标志物E-cadherin、CK19，间质标志物Vimentin、α-SMA及目标基因Trps1的表达，并分析Trps1与上皮、间质标志物表达间的相关性；然后用含Trps1基因全长腺病毒或Trps1siRNA转染HIBECs上调或干扰Trps1表达，重复上述实验，探讨Trps1
3、对HIBECsEMT的调控作用。结果结果应和方法相对应。注意表述时的归纳总结，并突出实验组的结果；体外模拟CPRI处理HIBECs，冷保存≤12h，细胞内Trps1表达增加，随冷保存时间延长持续减少（P＜0.05）；同时，上皮标志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表达持续减少（P＜0.05），间质标志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表达持续增加（P＜0.05），相关分析显示在该过程中，Trps1与上皮标志物表达正相关r=?（P＜0.01），而与间质标志物表达负相关（P＜0.01）。含Trps1基因全长腺病毒转
4、染HIBEC后，重复上述CPRI诱导实验，上皮标志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表达增加（P＜0.05），间质标志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表达减少（P＜0.05），CPRI诱导HIBECsEMT效应受到抑制；Trps1siRNA转染HIBECs后，上皮标志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表达减少（P＜0.05），间质标志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表达增加（P＜0.05），促进CPRI诱导HIBECsEMT效应。结论体外模拟CPRI可诱导HIBECs发生EMT，Trp
5、s1参与调控HIBECsEMT，发挥重要的拮抗作用并可能逆转该过程。[关键词]Trps1；胆管上皮细胞；上皮-间质转化；冷保存再灌注损伤[中图法分类号]R361+.3;R394.3;R657.4+6[文献标志码]ATrps1regulatesepithelial-mesenchymaltransitionofintrahepaticbiliaryepithelialcellsChengZhe,TianJu,ZhengShuguo（InstituteofHepatobiliarySurgery,SouthwestHospital,Th
6、irdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,China,400038,China）[Abstract]ObjectiveToobservetheepithelial-mesenchymaltransition(EMT)ofhumanintrahepaticbiliaryepithelialcells(HIBECs)inducedbycoldpreservationreperfusioninjury(CPRI),andtostudytheroleoftricho-rhino-pharyngealsyn
7、drometype1(Trps1)intheoccurrenceofHIBECs’EMT.MethodsFirstHIBECswereplacedin4℃UWsolutionfor12,24,48hours,thenwereincubatedin37℃normalserum-containingmediumfor1hour,respectivelysimulatingthecoldpreservationstageandthereperfusionstageofCPRI.ExpressionsofE-cadherin,CK19,Vi
8、mentin,α-SMAandthetargetgeneTrps1inHIBECsweredetectedbyRT-PCRandWesternblottingaftertreatmentofHIBECswithCPRI,andthec
