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《莜麦水溶性蛋白的提取及sds-page分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、摘要：以筱麦为实验材料，通过脱脂、水提、盐析和SephadexG25凝胶排阻层析等步骤提取筱麦水溶性总蛋白。通过SC6-PAGE初步分析筱麦的蛋白组成，与黑麦、高粱、慧米水溶性蛋白进行比较，结果表明筱麦蛋白含量较高，具有较高的营养价值。关键词：筱麦水溶性蛋白黑麦高粱養米TheExtractionandSDS-PAGEAnalysisofWater-solubleProteinofNakedoatsAbstract:Usingnakedoatsastheexperimentalmaterial,extracttotalwatersolubleprotei
2、nofnakedoatsbydegreasing,extraction,saltingandSephadexG25size-exclusionchromatography.AnalysethecompositionofthenakedoatsproteinpreliminarybySDS-PAGEandcomparewiththewatersolubleproteinofryeChinesessorghumandbarley.Theresultsshowthatcontentofnakedoatsproteinishigherandhasthehigh
3、nutritionalvalue・Keywords:NakedoatsWater-solubleProteinRyeCchinesesSorghumBarley夜麦为禾谷类作物，学名裸燕麦。菠麦原产中国，喜寒凉，耐干旱，抗盐碱，生长期短。蔽麦营养丰富，耐饥抗寒，糖分少，是糖尿病患者较好的食品，脂肪中含冇较多的亚汕酸，是老年人常用的疗效食品。此外，维生素和磷、铁等物质也比较丰富。山西省筱麦种植面积约为17万公顷，总产量14〜15万吨，占到全国的10%。筱麦在山西省农业经济中占有重要地位，因此，对筱麦的深入研究有利于提高筱麦食甜的深加工，产生一定的经济效益
4、。1材料与方法1.1仪器与材料筱麦、黑麦、高粱、惹米购白当地市场实验所用试剂均为分析纯SephadexG25层析柱、蛋白质纯化系统为GEHealthcare产品电泳槽及电泳仪为北京六一产品1.2实验方法1.2.1筱麦水溶性蛋口的提取筱麦经过低温T燥后粉碎，过0.2俪孔径筛网，以3:1(V/m)的比例加入丙酮，4°C条件卜•搅拌脱脂3小时后减压抽滤，向所得滤饼中加入乙瞇，低温搅拌3小时，减压抽滤,滤饼低温十燥后即为衣麦脱脂粉。取蔽麦脱脂粉20g,加入200也浸提缓冲液(20mmol/LTris-HCl,pH8.0),在4°C条件下搅拌浸提6小时，1200
5、0Xg离心，取上清,加入硫酸钱至80%饱和度，4°C条件卞搅拌盐析6小时，12000Xg离心，沉淀用少量浸提缓冲液溶解。所得溶液含有大量硫酸钱，影响进一步电泳及活性测定。因此，选用SephadexG25层析柱进行脱盐处理,缓冲液为20mmol/LTris-HCl,100mmol/LNaClpH8.0,控制流速为0.5mL/mino收集蛋白洗脱峰,进行SDS-PAGE分析。同样方法制备黑麦、高粱、慧米水溶性总蛋白。1.2.2筱麦水溶性蛋口的SDS-PAGE分析对提取的筱麦、黑麦、高粱、慧米水溶性总蛋口进行SDS-PAGEt］分析。浓缩胶浓度为4%,分离胶
6、浓度为12.5%,浓缩胶电压80V,分离胶电压100V,使用考马斯亮蓝R-250染色。2结果与讨论2.1蔽麦水溶性蛋白的提取3.53.93.®3-t3-fl3-53-fc3・$3.83.23.23.23.23.»由图可知，随着洗脱体积的增加，吸光度值增加，当洗脱体积达到一定值时，吸光度值出现第一个峰值，此后吸光度值随着洗脱体积的增加而减小，当减小到最小值吋，吸光度值随着洗脱休积的增加而增加，当洗脱体积达到一定值时，吸光度值出现第二个峰值，口笫-个峰值大于第二个峰值。此后吸光度值随着洗脱体积的增加而减小。由图可知，随着洗脱体积的增加，电导率增加，当洗脱体
7、积达到一定值时，电导率出现第一个峰值，此后电导率随着洗脱体积的增加而减小，当减小到最小值时，电导率随着洗脱体积的增加而增加，当洗脱体积达到一定值时，电导率出现笫二个峰值，此后电导率随着洗脱体积的增加而减小。2.2蔽麦水溶性蛋白的SDS-PAGE分析蛋口条带12345图中1,2,3,4,5均为水溶性蛋白条带，从上到下蛋白的分子量依次减小。前四个蛋白条带与5相比较宽，口个别蛋白不是很明显，是脱盐前样品对应的电泳图，条带5较窄，蛋白种类较多，H.明显，是脱盐后样品对应的电泳图。2.3讨论水溶性植物功能蛋白因其具冇“三高一强”的功能特性，在面制品应川中不但能提
8、高蛋白质含最，增加营养，而且明显改善组织结构，增加馒头、面包、血条的弹性、韧性及表面光泽度，且
