五种深海鱼提取蛋白的SDS-PAGE分析-论文.pdf

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1、第35卷第3期济宁学院学报2014年6月Vo1．35NO．3JournalofJiningUniversityJun．2014文章编号：1()(14—1877(2014)03—43一()3五种深海鱼提取蛋白的SDS—PAGE分析刘顺湖，王瑞韬(济宁学院生命科学与工程系，山东曲阜273155)摘要：为了给深海鱼类提取蛋白质的深加工提供参考，以三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和带鱼五种深海鱼为试验材料，采用酸碱法提取鱼肉中蛋白质，通过SDS—PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析，研究了提取蛋白质的亚基构成及其相对含量．结果表明，(1)五种鱼的提取蛋白质电泳图谱差异较

2、大，分别由不同数量和不同分子量的亚基构成．三文鱼、狭鳕、比目鱼、黄鱼和带鱼的亚基数量分别为14、13、13、14和12个；(2)五种鱼的提取蛋白质的亚基相对平均含量变异范围为7．15～8．35％，变异系数变异范围为38．15～78．63％．亚基相对含量大于10％的较大亚基的数量和分子量因鱼的种类而异．五种鱼的提取蛋白质亚基数量、分子量和相对含量均存在差异，说明其蛋白质构成不同，因而可能有不同的营养价值．关键词：深海鱼；提取蛋白质；SDS-PAGE；亚基相对含量中图分类号：Q51文献标识码：A中国海洋鱼类有1700多种，经济鱼类300多1．1．1试验材料种，

3、常见而产量较高的经济鱼类约70多种⋯，分试验材料为三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和布于渤海、黄海、东海、南海等海域．其中，深海带鱼等五种深海鱼，在青岛团岛农贸市场购得．鱼类是对水深超过200米的鱼类的总称，深海鱼大1．1．2试验试剂与仪器多自然生长，深海污染少，生长时期长，具有很试验试剂与仪器由济宁学院生命科学与工程高营养价值·．崔芳玲M对三文鱼、狭鳕、比目系生命科学实验中心提供．不连续体系SDS-PAGE鱼、小黄鱼和带鱼五种深海鱼进行蛋白质含量的比有关试剂的配制，电泳贮存液的配制参照参考生物较研究，发现比目鱼中蛋白质含量高于其它四种鱼化学实验的方法．试验所

4、用Marker为低分子量类．王可玲等对真鲷、黑鲷、牙鲆、鲈和小黄蛋白质Marker(14．4kDa一97．4kDa)，购买于北京鱼这五种鱼类进行电泳分析，确定同工酶表达的组索莱宝科技有限公司．织特性．但对于三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和1．2试验方法带鱼五种深海鱼提取蛋白质的亚基研究尚未见报1．2．1鱼蛋白的提取方法道．鉴于此，本研究通过SDS—PAGE方法分析这五参照陈申如等人试验，，利用酸碱法提取鱼种深海鱼提取蛋白质的亚基构成及其相对含量，为肉蛋白，试验于2013年4月在济宁学院南四湖湿深海鱼类提取蛋白质的深加工提供参考．地生物资源研究所进行，平均室温

5、15—20~C．其中蛋白质提取的流程如下：1材料与方法(1)用分析天平准确称取4g鱼肉放于研钵中．1．1试验材料与试剂(2)将研钵中加入1．0mol／L的盐酸2mL，研收稽日期：2014一Ol一18作者简介：刘顺湖(1960一)，男，山东招远人，济宁学院生命科学与工程系教授，博士，研究方向：生物蛋白质深加工·-——43·-———碎鱼肉并转移至烧杯中．按料水比1：9(M：V，g／m1)的比例加入蒸馏水．(3)用1．0mol／LNaOtt调节PH到2．39，将蛋白液转入离心管中．(4)将上述离心管振荡器中振荡1．5h，达到时间后置于离心机中离心(转速为4500

6、r／min)，时间15min，待离心完毕，将上清液转移到另一只同样的离心管中．(5)取上清液，再次置于4℃离心机中离心由图l和表l可见，五种鱼提取蛋白的电泳(转速为4500r／min)，时间15min．再次得到上清图谱存在较大差异．其中，三文鱼有14个亚基，液，即为待测鱼蛋白．亚基的分子量变异范围为12．58～92．08KDa：1．2．2鱼蛋白亚基分析狭鳕有l3个亚基，亚基的分子量变异范围为将脱色后的电泳胶带倒去脱色液，放置在l4．65～96．72KDa：比目鱼有13个亚基，亚基的分Alphaimager仪器下通过连接电脑进行拍照取子量变异范围为l2．62

7、～99．47KD~黄鱼有l4个亚样．再用Quantityone软件进行分析．基，亚基的分子脬量变异范围为l0．88～100．88KD~1．2．3数据分析带鱼有12个亚基，亚基的分子量变异范围为利用Quantityone软件对电泳图片进行分12．48～99．47KDa．由此推断，五种鱼的蛋白质种析整理数据，用Excel软件进行描述性统计分析，类不同，其营养价值可能存在差异．进行平均值和变异系数的计算．变异系数的计算公2．2五种鱼提取蛋白的亚基相对含量式为：表2五种鱼提取蛋白质亚基的相对含量(％)C．V：羔1o0％，其中S公式为S2试验结果分析2．1五种鱼提取

8、蛋白的SDS—PAGE电泳图谱五种鱼提取蛋白质的电泳图谱见图1，蛋