化浊行血汤含药血清血管内皮保护作用及其体内给药时效差异的研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果化浊行血汤含药血清血管内皮保护作用及其体内给药时效差异的研究【摘要】　　目的观察化浊行血汤含药血清对缺氧内皮细胞的保护作用，以及其药理作用与动物灌胃给药的量-时效关系。方法以化浊行血汤不同给药方案、药后不同取血时间所得的药物血清为受试对象，培养血管内皮细胞，进行缺氧复氧实验，复氧同时给予不同化浊行血汤含药血清干预，采用MTT法观察不同含药血清对缺氧内皮细胞活性的影响。结果含药血清各组

2、与模型组比较有显著差异(P【关键词】化浊行血汤；内皮细胞；血清药理学；MTT法中药复方进入体内后，不同剂量的药物其在体内的吸收、分布、代谢、排泄不同，血药浓度达峰时间和起效时间亦有较大差异。为研究中药复方化浊行血汤对内皮缺氧损伤的保护作用，本实验采用MTT法观察化浊行血汤含药血清对内皮细胞抗缺氧能力的影响，并据此筛选出合适的含药血清浓度用于后续内皮缺氧损伤的研究。　1材料与仪器对象雄性Sprague-dawley大鼠，体质量g，购于山东中医药大学动物中心，符合国家二级实验动物标准；人脐静脉内皮细胞系。试剂1640培

3、养基、胎牛血清；四氮唑蓝(美国SIGMA)；二甲基亚砜(北京世纪银丰科技有限公司)。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果仪器JJT-1300超净工作台；5%CO2恒温培养箱；倒置相差显微镜；EL340I全自动酶标仪。　2方法.1药物的配制和含药血清的制备化浊行血汤由荷叶、焦山楂、决明子、赤芍、酒大黄、路路通、

4、虎杖、何首乌，制水蛭粉组成，为水煎醇沉工艺制作浸膏，4℃贮存备用。　　取SD大鼠按/kg灌服化浊行血汤。中药A组大鼠按照每日灌胃两次连续d，中药B组大鼠按照灌胃1次/d，连续d，空白组灌服等量生理盐水，末次给药前禁食1h，给药后30，60，90，150min腹主动脉取血，分离血清并灭活、过滤除菌，置－20℃保存备用。.2内皮细胞体外缺血、缺氧模型的建立和实验分组选择生长良好的内皮细胞，以5×104/ml密度接种于96孔板，培养2h后，分为正常对照组、模型组及药物各剂量组进行缺血、缺氧造模及干预。①正常组：换1640

5、培养基，并始终在正常条件下培养。②模型组：以XX年叶武等［1］报告的方法稍加改进。缺氧时先将缺氧罐提前10课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果min充入氮气，以保证缺氧罐内气体的纯度，罐周边封凡士林密闭，然后置于37℃生化培养箱中，备用。将培养板中内皮细胞换缺氧无血清1640培养基；将其放入缺氧罐内。缺氧6h

6、后，将培养液换为含10％正常大鼠血清的1640培养液，置于培养箱中继续培养1h，然后进行检测。③中药各剂量组：造模同模型组，缺氧h后，将培养液换成含10％SD大鼠药物血清的1640培养液，置于培养箱中继续培养1h，然后进行检测。.3四氮唑蓝(MTT)检测各组内皮细胞两次，各加入1640100μl，MTT1μl，继续置培养箱中孵育h。吸弃孔内液体，每孔加入二甲基亚砜100μl，终止反应。振荡器振荡10min，全自动酶标仪490nm波长，空白孔调零，测定各孔吸光度值。.4统计学处理使用软件进行统计。组内差异采用t检验，

7、组间差异采用多因素方差分析，F检验(Avon)。　3结果.1各组内皮细胞形态特征变化镜下观察正常组内皮细胞展开贴壁，形态无明显改变。体外模拟缺氧h后模型组内皮细胞回缩，间隙变大，变圆细胞增多，常规培养1h后大量内皮细胞变圆并呈团漂浮，折光性增强。中剂量中药各组镜下观察缺氧并经含药血清干预后也可见细胞回缩，部分细胞变圆并漂浮；但各组仍见贴壁的内皮细胞数量明显多于模型组，漂浮变圆细胞明显少于模型组。.2各组内皮细胞缺血缺氧后细胞活力的比较结果见表1。表110％化浊行血汤含药血清对缺氧内皮细胞MTT比色实验的影响　　　　

8、4讨论课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果.1化浊行血汤含药血清的对缺氧复氧内皮细胞的保护作用王新陆教授根据多年的临床经验，以“血浊”立论，创立清化血