百合知母汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用

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1、百合知母汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用作者：许惠琴，王华富，高钦，蔡宝昌【摘要】【目的】观察百合知母汤含药血清对氯化镉(CdC12)致大鼠卵巢颗粒细胞(GC)损伤的影响。【方法】⑴分别选用23d、3月和12月龄雌性SD大鼠各5只，取卵巢进行GC计数，连续观察10d内GC的生长情况，采用噻唑蓝(MTT)比色法于490nm波长处测定光密度(D)值，筛选最适卵巢GC。(2)于最适卵巢GC体外培养的第3天加入终浓度分别为10、20、40、60、80umol/L的CdC12刺激液，37°C、体积分数5%C02培养箱内培养48h后，采用MTT法观察细胞生长情况，筛选CdC12刺激液的

2、最适浓度。(3)将筛选出最适的卵巢GC体外培养72h后，在96孔板内分别加入最适浓度的CdC12刺激液及终浓度分别为体积分数125%、25%、5%、10%、20%的大鼠百合知母汤含药血清，依据含药血清浓度由低至高分为5组，同时另设对照组：①空白对照组：体积分数10%DMEM培养液，②模型组：体积分数10%DMEM培养液+最适浓度CdC12刺激液，③空白血清组：空白血清+最适浓度CdC12刺激液。继续培养48h后采用MTT比色法测定D值，观察百合知母汤含药血清对大鼠卵巢GC以及对CdC12致卵巢GC损伤后的影响。【结果】23d龄大鼠卵巢GC数量多、形态好，呈指数生长，23d为最适生

3、长时间。CdC12浓度与卵巢GC的活性呈剂量依赖性关系，随浓度增加而损伤加重，其中浓度为40umol/LCdC12培养液中的GC细胞边缘出现皱缩，为最适CdC12刺激液浓度。百合知母汤含药血清对卵巢GC生长有促进作用，能抵抗4Oumol/LCdC12刺激液对GC的损伤作用。【结论】百合知母汤含药血清保护大鼠卵巢GC的作用与其能拮抗CdC12的损伤和增加卵巢GC的活性和数量有关。【关键词】百合知母汤/药理学；围绝经期综合征/中药疗法;血清药理学;细胞培养百合知母汤出自张仲景《金匮要略》，是临床治疗围绝经期综合征的基本方剂。目前越来越多的研究将围绝经期综合征与妇女卵巢功能衰退和细胞凋

4、亡联系起来，认为卵巢颗粒细胞(GC)凋亡，触发卵泡闭锁，颗粒细胞产生雌激素减少促进了性腺激素受体的减少从而引发本病［1-2］。因此本实验观察了百合知母汤含药血清对体外培养的卵巢GC的影响，以及对氯化镉(CdC12)致卵巢GC损伤后的作用，现报道如下。1材料与方法11实验动物23d、3月和12月龄清洁级雌性SD大鼠，由扬州大学比较医学动物中心提供，动物合格证号：SYXK(苏)XX0053。12药物及试剂百合知母汤(百合与知母质量比为3:1)，制成含生药量为08g/mL的浓缩液。DMEM为美国GIBCO公司产品，小牛血清(DBCS)为JRHbiosciences公司产品。噻挫蓝(MT

5、T)由U1trapuregrade,Amresco分装，临用前用磷酸盐缓冲液(PBS)配制成50mg/LMTT溶液，于4°C冰箱保存。二甲基亚砜(DMS0)为上海久亿化学试剂有限公司产品。注射用血促性素(PMSG)为宁波市三生药业有限公司产品(批号：070909)，PBS(pH=70)为福州迈新公司产品(1小袋溶解在2L蒸馏水中)，CdC12由亭新化工试剂厂生产。13仪器JAXX型电子秤为上海天平仪器厂产品，SpectraMAX190酶标仪为美国MolecularDevices公司产品，NAPCOC02INCUBAT0R购自PrecisionScientific公司，XSZD2倒

6、置生物显微镜为重庆光学仪器厂产品，SWCJIF超净工作台为苏州安泰空气技术有限公司产品，LDZ52型全自动离心机为北京医用离心机厂产品，DKB8A型电热恒温水槽为上海精宏实验设备有限公司产品。14卵巢GC最适生长时间和CdC12刺激液最适浓度的筛选XX年第26卷广州中医药大学学报许惠琴，等.百合知母汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用［1/2］第6期141卵巢GC最适生长时间取23d、3月和12月龄雌性SD大鼠各5只(其中23d龄大鼠提前48h皮下注射PMSG,66U/只），脱颈椎处死后，放入盛有体积分数75%酒精的玻璃缸内浸泡lOmino在无菌条件下，取出卵巢，剪破卵泡，20

7、0目尼龙膜过滤，取900uL细胞悬液，用04mg/L台盼蓝溶液10OpL染色，计数活细胞数（拒染）及死细胞并观察细胞活率。将3瓶细胞密度分别调至1X106个/mL每孔加80UL细胞混悬液，12个复孔，共10板，放入37°C、体积分数5%⑶2培养箱内培养。每隔24h抽取1板加5mg/LMTT20uL，4h后加DMS0150uL，振荡10min，于490nm波长处测定光密度（D）值，连续观察10d内不同时期GC的生长情况，筛选出最适卵巢GC。未测板每隔3d更换50nL培养液，继续培养