宁心红杞含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

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1、宁心红杞含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制作者：李育，齐栩，王明艳，马红【摘要】　　目的探讨宁心红杞含药血清对离体大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养的卵巢颗粒细胞中用氯化镉造模，加入宁心红杞含药血清共同作用24h后收集颗粒细胞，通过流式细胞仪观察其凋亡现象和用酶标法检测caspases-3蛋白的表达。结果流式细胞仪结果显示宁心红杞含药血清可明显改善氯化镉导致的颗粒细胞凋亡，凋亡峰较模型组明显降低；含药血清组明显降低caspases-3的表达，与模型组相比有显著性差异（P＜0.01）。结论宁心红杞可通过降低caspases-3蛋

2、白的表达来改善颗粒细胞的凋亡，延缓卵巢衰老。【关键词】宁心红杞含药血清卵巢颗粒细胞凋亡　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectandmechanismofmenoprogen,onovarygranulosecells'(GC)apoptosisfromfemaleratsinvitro.MethodsCadmiumchlorideodel,thentheserumenoprogenfromratsentetry(FCM)andtheexpressionofcaspases-3coasdectectedbyenzym

3、elinkedimmunosorbentassay.ResultsTheresultoffloetryshoenoprogencouldobviouslyimproveovarygranulosecellapoptosisinducedbycadmiumchloride,reducetheapoptoticpeakasparedtomodelgroup,anddecreasetheexpressionofcaspases-3,thereodelgroup(P＜0.01）.ConclusionThemenoprogencanimproveovaryg

4、ranulosecellapoptosisthroughdecreasetheexpressionofcaspases-3,delayovariesaging.　　Keyenoprogen;Ovary;Granulosecells(GC);Apoptosis　　细胞凋亡与卵巢正常或异常的功能相关，包括卵母细胞的损耗。很多研究证实生殖细胞的丢失源于细胞凋亡，但女性生殖细胞在发育过程中大量丢失的确切原因还不明了［1］。现代研究表明卵母细胞的凋亡仅是卵泡闭锁的开始，卵泡颗粒细胞的凋亡才是卵泡退化的根本原因［2］。宁心红杞胶囊主要由枸杞子、桑椹、红花、地黄

5、等组成，在临床上用于治疗围绝经期综合征已取得确切疗效［3,4］。为了观察宁心红杞胶囊对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响，探讨其可能的作用机制，我们以体外培养的SD大鼠排卵前卵泡颗粒细胞为实验对象，观察宁心红杞含药血清对其凋亡及caspases-3的影响。　　1材料　　1.1动物22～27日龄左右和3月龄健康雌性SD大鼠，由南京中医药大学动物实验中心提供。二级动物饲养条件［层流柜饲养，温度（24±2）℃，湿度60％左右，24h通风，自然照明］饲养，普通饲料喂养，自由饮水。　　1.2试剂孕马血清促性腺激素（PMSG）（南京创瑞生物试剂公司）；DMEM-F12

6、培养基（1∶1）∶（GIBCO）；青链霉素溶液（江苏省人民医院）；小牛血清（杭州四季青试剂公司）；多孔细胞培养板（COSTAR）。　　1.3药物宁心红杞胶囊干浸膏：由美福天然药物科技公司提供，每克干浸膏相当于原生药材165g。生产批号：20040820。以许文生氏公式计算人的体表面积,再以Meeh-Rubner氏公式计算1kg大鼠体表面积,采用直接计算法获得大鼠的每日宁心红杞胶囊用药量为0.324g。　　2方法　　2.1含药血清的制备及灭活取3月龄雌性SD大鼠,按体重随机分为正常对照组、宁心红杞胶囊组。宁心红杞胶囊组大鼠按日服量的5倍灌服宁心红杞水

7、溶液，2次/d，连续给药3d，第4天1次灌服全天剂量；正常对照组大鼠灌服等量生理盐水，同时取血。各组均于末次给药后1h在麻醉状态下经颈动脉采血，将各组血液置于4℃放置4h，分离血清(1000r/min,10min),取上清液，同组混匀。将每组血清混匀以0.22μm滤器抽滤除菌，经56℃，30min灭活后分装，-20℃保存备用。　　2.2颗粒细胞的制备取22～27日龄雌性大鼠，皮下注射孕马血清（PMSG）50IU/只，常规饲养48h后颈椎脱臼法处死，用75％乙醇快速浸泡鼠身，剪开皮肤无菌摘取大鼠的双侧卵巢，置于事先准备好的装有生理盐水的西林瓶内，移至

8、超净台内的玻璃皿中，去包膜及周边的脂肪组织，用NS清洗两次，置于玻璃皿中，以适量含100U/ml青霉素和100mg/ml链