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1、二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响作者：王琳,连方,马凤梅,刘延荷,孙振高,张艳萍,滕怀香【摘要】目的观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响。方法采用血清药理学方法,以不同含药量的初老小鼠血清,与体外培养的颗粒细胞共同培养48h,观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞雌激素(E2)、孕酮(P)分泌量(化学发光免疫测定法)以及抑制素B(INHB)分泌量(ELISA法)的影响。结果二至天癸颗粒含药血清可明显增加颗粒细胞E2、P、INHB的分泌量。结论
2、二至天癸颗粒可通过调节颗粒细胞的分泌功能进而改善初老小鼠卵巢功能。【关键词】二至天癸颗粒；卵巢颗粒细胞；雌激素；孕酮；抑制素B；含药血清Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofserumcontainedErzhiTianguiGranuleonthesecretionfunctionofovariangranulosacellsfromprimarysenilemice.MethodsTheserumwithdecoctionfromprimarysenilemice
3、wasaddedtoculturedgranulosacellsandincubatedfor48h.Thentheconcentrationofestradiol(E2),progesterone(P)andinhibinB(INHB)in8culturedmediumweremeasuredbychemiluminescenceimmunoassay(CLIA)andSandwichELISArespectively.ResultsTheserumcontainedErzhiTianguiGran
4、ulecouldincreasethesecretionofE2,PandINHB.ConclusionErzhiTianguiGranulecanimprovetheovarianfunctionofprimarysenilemicebyregulatingthesecretionfunctionofgranulosacells.Keywords：ErzhiTianguiGranule；ovariangranulosacell；estradiol；progesterone；inhibinB；seru
5、mcontaineddrug二至天癸颗粒是根据连方主任医师多年的临床研究组方而成,具有补肾益天癸、养血调冲任的作用,临床实践证明能够提高卵细胞质量,进而提高受精率、卵裂率和妊娠率[1],动物实验也证明此方可改善小鼠受精率、卵裂率,并可促进早期胚胎分化[2]。为进一步探讨二至天癸颗粒提高高龄妇女卵巢反应性的作用机制,本实验以雌性自然衰老小鼠为研究对象,采用血清药理学方法,从影响颗粒细胞体外分泌功能的角度初步探讨其疗效机制。 1实验材料 1.1仪器8ACCESS化学免疫发光检测系统(BeckmanUS
6、A)；酶标仪(MultiskanMK3ThermoLabsystems)。 1.2动物初老昆明种小鼠,12月龄,雌性,体重50～70g,山东中医药大学实验动物中心提供。 1.3药物二至天癸颗粒,山东中医药大学附属医院制剂室提供(院内批号[01]FZ032-03)。药物组成：女贞子、墨旱莲、枸杞子、菟丝子、当归、白芍、川芎、熟地黄、制香附、炙甘草等。 1.4试剂 DMEM/F-12培养基(1∶1)(Hyclone)；青链霉素溶液(Hyclone)；胎牛血清(GIBCO)；L-多聚赖氨酸(SIGM
7、A)；人绝经期促性腺激素(HMG,中国丽珠集团丽宝生物化学制药公司生产)；人绒毛膜促性腺激素(HCG,中国丽珠集团丽宝生物化学制药公司生产)；雌二醇(E2)及孕酮(P)化学发光免疫测定试剂盒(BeckmanAccess公司)；抑制素B(INHB)试剂盒(美国DSL公司)。8 2实验方法 2.1含药血清及正常血清的制备及灭活将初老小鼠25只随机分为5组,分别为初老空白组、二至天癸高、中、低剂量组(分别按成人剂量的18、12、6倍剂量给药)以及六味地黄汤对照组。中药各组每日灌服2次,连续3d。第4日8
8、:00Am灌胃1h后,无菌条件下股动脉取血,对照组小鼠等量生理盐水灌胃,同时取血。将各组血液于4℃下放置4h,3000r/min离心10min,取上清液,经0.22μm滤器抽滤除菌,同组混匀,经56℃、30min灭活分装,-20℃保存备用,同时将取血后的小鼠用颈椎脱臼法处死,解剖,观察各组小鼠双侧卵巢。 2.2颗粒细胞收集取12月龄小鼠腹腔注射HMG18U,48h后同时腹腔注射HCG20U,14～16h后脱颈处死,解剖取出输卵管,在体式镜下用TB针划破
