中药尿酸利仙含药血清对tnfa诱导的人血管内皮

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1、中药尿酸利仙含药血清对TNFa诱导的人血管内皮【摘要】目的：观察中药尿酸利仙(含药血清)对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的人血管内皮细胞(ECV)血管细胞黏附分子1(VCAM1)mRNA表达的影响。方法：①体外培养人血管内皮细胞，分别用不同浓度(12.5、25、50μg/ml)的TNFα刺激;②体外培养人血管内皮细胞，培养液中加入TNFα至终浓度为25μg/ml，分别孵育细胞8、16、24、48小时。③用25μg/ml的TNFα孵育细胞16小时，同时用含不同浓度(2.5%、5%、10%)中药尿酸利仙含药血清的培养液进行干预

2、，用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)技术测定血管内皮细胞VCAM1mRNA表达。结果：低、中、高浓度TNFα刺激均可显著上调血管内皮细胞VCAM1mRNA表达(P<0.01)，各刺激组间差异无统计学意义(P>0.05)。25μg/ml的TNFα在16、24和48小时均可显著上调血管内皮细胞VCAM1mRNA表达(P<0.01)，各干预组间差异无统计学意义(P>0.05)。低、中、高浓度的中药尿酸利仙含药血清干预均可显著降低VCAM1mRNA表达(P<0.05，P<0.01)。结论：中药

3、尿酸利仙含药血清可抑制VCAM1mRNA过度表达，可能是减轻TNFα诱导的人血管内皮细胞炎症损伤及抑制炎症反应的机制之一。【关键词】中药尿酸利仙血管细胞黏附分子1TNFα人血管内皮细胞　AbstractObjective:ToinvestigatetheeffectofNiaoSuanLiXiancontainingserumonexpressionofvascularcelladhesionmolecule(VCAM1)mRNAinvascularendothelialcellsinducedbyTNFα.Methods:V

4、ascularendothelialcellsulatedl)ofTNFαinvitro,.Atthesametime,thecellsldensityofTNFαfor8,16,24,and48hours.They.TheexpressionofVCAM1mRNAinvascularendothelialcellsRNAinvascularendothelialcellsinducedbyTNFαincreasedsignificantly(P<0.01),butnodifferenceRNAinvascularendot

5、helialcellsinducedbythe25μg/mldensityofTNFαincreasedsignificantlyafter16,24,and48hourincubation(P<0.01).NiaoSuanLiXiancontainingserumatallexperimentaldensitysignificantlydoRNA(P<0.05，P<0.01).Conclusion:DoaybeoneofthemechanismsofNiaoSuanLiXianreducingtheinflammat

6、oryinjures.　　KeyoleculeTNFαvascularendothelialcells　　高尿酸血症是除高胆固醇血症、高血压、糖尿病、吸烟等冠心病(coroaryheartdisease,CHD)主要危险因素外的又一被公认的高危因子。如今控制高危因素的意义不仅在于调控目标值，而是通过抗血管壁的炎症来控制动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)，减少心脏事件的发生。笔者用中药尿酸利仙颗粒剂治疗高尿酸血症，在临床应用多年取得较好的效果。本文旨在探讨中药尿酸利仙(含药血清)抗黏附、抗血管壁慢性炎症的分子机制。　　1

7、实验材料　　1.1主要试剂　　RPMI1640培养液、胎牛血清(FCS)和青霉素、链霉素为英国GibcoBrl公司产品;二性霉素B、胰蛋白酶均为美国Sigma公司产品;RNA提取试剂Trizol、逆转录和PCR扩增试剂盒、引物合成均购自上海生物工程公司。　　1.2内皮细胞株　　血管内皮细胞株(endotholialcellofvessels,ECV)由浙江中医药大学友情提供。　　1.3内皮细胞培养　　将细胞复苏后，用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液(内含青链霉素各100u/ml)培养，消化传代采用0.25%胰酶，0.02%EDT

8、A，培养条件为5%CO2、37℃。　　1.4人血清制备　　1.4.1正常人血清制备　　选择体检合格的年轻志愿者4名，晨各抽空腹血15ml，共60ml，离心，取血清，超滤，置-40℃冰箱保存备用