再生障碍性贫血小鼠造模方法的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果再生障碍性贫血小鼠造模方法的实验研究作者：刘啸，祝彼得，徐浩，芦殿荣，冯雪梅【关键词】,再生障碍性贫血摘要:目的:改进原有的再生障碍性贫血动物模型的制备方法并进行比较。方法:将Balb/c小鼠分为4组，按文献以0Co-γ射线、环磷酰胺、乙酰苯肼、氯霉素等不同方法造模获得3种再生障碍性贫血模型。检查外周血象、骨髓有核细胞数量，细胞培养比较粒、红、巨核系集落产率。结果:种方法均可导致外周血象降低，BMC数量减少，

2、细胞集落产率降低，但改良以后的制法在外周血象协同性下降水平、骨髓抑制持续时间方面与其他两种有显著性差异。结论:Co/CY/APH复合造模方法简单，周期较短，结果稳定可靠，可作为一种较好的AA模型。关键词:再生障碍性贫血;动物模型;0Co-γ射线;环磷酰胺;乙酰苯肼再生障碍性贫血是由于造血干/祖细胞增生，分化障碍或造血微环境异常而导致的一类以造血组织功能衰竭为特征的疾病。其病因复杂，常与化学药物、放射线、自身免疫性疾病相关。实验血液学技术的发展，使其致病机理进一步被阐明。而研究课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年

3、内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果的深入有赖于良好的AA动物模型的建立。目前，AA动物模型的造模方法种类较多，但存在再障期不稳定、各血系降低水平不一致、方法繁琐、周期较长等缺点。本实验室在综合几种常见造模方式的优点基础上，建立新的造模方式，并与其他常见的方法作比较，以期提供一种简单、有效、稳定的模型制备方法。1材料与方法试剂环磷酰胺由上海华联制药有限公司提供，批号:国药准字H;氯霉素注射液由天津药

4、业焦作有限公司提供，批号:国药准字H410XX8;乙酰苯肼由上海试剂三厂提供，批号:S320XX3。1.动物Balb/c小鼠，6～8周龄，体重18～22g，♀♂兼用，清洁级，由成都中医药大学实验动物中心提供。1.方法分组:将60只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、CY/Co组、CY/CH组、Co/CY/APH组4组。造模:第1d，Co/CY/APH组予APH80mg/kg，皮下注射，其余组予生理盐水等量注射。第2dCY/Co组、Co/CY/APH均予2cGy剂量的0Co-γ射线照射处理，正常空白组及CY/CH组小鼠假照射。照射后第3d，C

5、Y/Co组连续给予课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果CY50mg/kg共3d，CY/CH组给予CY50mg/kg+CH60mg/kg共3d，Co/CY/APH组于CY50mg/kg一次性腹腔注射，正常组予生理盐水等量注射3d。检测:各组小鼠在造模后7d、11d、15d眼内眦静脉采血，自动血球计数仪测定外周血象，断颈处死小鼠，无菌状态

6、下取小鼠股骨，2mLIMDM培养基冲出骨髓细胞，制备单细胞悬液，吸取100μL做骨髓有核细胞计数。以第7d骨髓细胞按本室常规做细胞培养，制备培养体系，接种细胞，置CO培养箱培养，7d后计数CFU-GM、BFU-E、CFU-Meg集落数。1.统计实验数据用软件做t检验。结果.1外周血象的变化表1、2表明，CY/Co组、CY/CH组、Co/CY/APH组造模后外周血象均有不同程度的下降，第7d检测，3个造模组WBC、PLT均显著下降，但CY/CH组RBC和Hb下降幅度明显较CY/Co组、Co/CY/APH组小，第15d已基本接近正常组水平。CY

7、/Co组RBC、Hb值较CY/CH组低，但与WBC、PLT下降幅度相比，仍然维持在一个较高的水平，但模型维持时间较长，至15d检测仍处于骨髓抑制期。Co/CY/APH组与前两组比较，三系降低均较明显，且RBC、Hb值下降幅度较CY/Co组更加明显，维持时间与CY/Co组无明显差异。表1造模第7天各组外周血象的比较注:与正常对照组比较，*P.骨髓有核细胞计数课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先

8、进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果由表3可以看出，第7d、11d、15d处死小鼠后计数骨髓有核细胞呈逐渐上升趋势，提示骨髓抑制随时间延长逐渐恢复。CY/C