实验性偏头痛小鼠造模方法探讨_1

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果实验性偏头痛小鼠造模方法探讨【关键词】偏头痛【摘要】目的摸索出皮下注射利血平造成小鼠脑内单胺类神经递质含量变化，且对小鼠行为、形态变化影响不大的sc利血平造模法。方法分别sc利血平、、/，在4、6、9天断头取脑，用RP-HPLC荧光检测器检测脑内4种单胺类神经递质含量。结果剂量组小鼠行为学几近无生命力，4种神经递质含量统计学上与空白组比较差异有显著性;组6天有1值统计学无意义，9天组行为学与组无异，而4天时行为学

2、优于组，RP-HPLC检测在统计学上有意义;组行为、形态好，但RP-HPLC检测结果大多在统计学上无意义。结论根据本实验，建议用利血平注射液造模偏头痛小鼠模型时，采用/kg造模4天。　　关键词偏头痛动物模型RP-HLPC荧光检测法课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　偏头痛是常见病、多发病之一，其发病机制至今尚未清楚。5-HT、儿茶酚胺

3、等神经递质早已被提出与偏头痛发作有关。偏头痛前驱期，大量释放的5-HT直接作用于脑膜血管上的5-HT受体，过度收缩脑膜血管;在头痛发作的前期，5-HT水平急剧下降，而尿中5-HT代谢产物增加，使脑膜血管扩张;给予5-HT释放剂芬氟拉明或利血平排空5-HT均能诱发偏头痛，这些事实都支持5-HT的功能紊乱与偏头痛的相关性。同时研究表明偏头痛患者中绝大多数症状可通过刺激多巴胺能系统而诱发，而多巴胺受体，尤其是多巴胺D2受体拮抗剂治疗偏头痛有效，多巴胺-β-羟化酶被认为是反应交感活性高低的指标，匡培根［1］及Callai等［2］研究发现，血清D-β-O

4、H不论头痛期还是非头痛期均较对照低，但头痛发作期较间歇期增高。去甲肾上腺素在偏头痛发作前3h内升高，头痛时下降，血浆水平改变与5-HT相平行。　　临床研究也发现，偏头痛患者外周血5-HT发病先兆期升高，发病高峰时降低，表明体内5-HT有一个由释放到消除的过程，这种5-HT含量的变化是偏头痛发作的主要直接原因，发现单胺类递质耗竭剂利血平能够诱发偏头痛。　　本实验通过参考偏头痛的病因病机及文献资料的造模方法［3～5］，于实验中发现:皮下注射利血平剂量过大，小鼠容易死亡，行为变化太大，几近无生机;过小，则脑内神经递质含量变化在统计学上差异无显著性。此

5、实验对利血平诱发偏头痛的动物模型进行了初步探讨，为摸索出sc利血平造成小鼠脑内单胺类神经递质含量变化，且对小鼠行为、形态变化影响不大的sc利血平造模剂量。1材料与方法课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　材料仪器高效液相色谱仪230型，荧光检测器363型，自动进样仪410型;色谱柱YWC-PackODS-AS-5μm12nmC18柱;隔

6、膜真空泵;数控超声波清洗器KQ3200DB;恒温磁力搅拌器JBZ-14型;pH酸度计PH201型;旋涡混合器XW-80A;超速冷冻离心机TGL-16G;电动玻璃匀浆机DY89-Ⅰ。　　1.试剂和药物DA、NE、5-HT、5-HIAA均为Sigma产品;EDTA-2Na;NaAC;冰乙酸;甲醇为优级纯;水为用娃哈哈纯净水重蒸馏3次;利血平1mg/ml。1.实验方法　　造模及处理方法课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意

7、义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果KM雄性小鼠120只，18～22g，随机分为12组，每组10只:/kg4天处死、6天处死、9天处死组;/kg4天处死、6天处死、9天处死组;/kg4天处死、6天处死、9天处死组;空白对照4天处死、6天处死、9天处死组;处死组连续按剂量分别sc利血平4天、6天、9天，后2h断头取脑，操作时须在冰台上进行，1min内取出全脑，用冰冷的生理盐水冲洗，除去血液，滤纸拭干，立即投入液氮中，固化后称重，每个脑组织大约加冰冷的/ml高氯酸液700μl，在冰浴中用电动的玻璃匀浆器匀浆

8、2min/个脑组织，将脑组织匀浆液转入Ependet离心管中涡流2min，置冷冻离心机内以1XXr/min离心20min。将离心后的上清液转入Epen