实验性偏头痛小鼠造模方法探讨

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1、实验性偏头痛小鼠造模方法探讨【关键词】偏头痛　　【摘要】目的摸索出皮下注射（sc）利血平造成小鼠脑内单胺类神经递质含量变化，且对小鼠行为、形态变化影响不大的sc利血平造模法。方法分别sc利血平0.7、0.4、0.15mg/（kg・d），在4、6、9天断头取脑，用RP-HPLC荧光检测器检测脑内4种单胺类神经递质含量。结果0.7剂量组小鼠行为学几近无生命力，4种神经递质含量统计学上与空白组比较差异有显著性;0.4组6天有1值统计学无意义，9天组行为学与0.7组无异，而4天时行为学优于0.7组，RP-HPLC检测在统

2、计学上有意义;0.15组行为、形态好，但RP-HPLC检测结果大多在统计学上无意义。结论根据本实验，建议用利血平注射液造模偏头痛小鼠模型时，采用0.4mg/kg造模4天。　　关键词偏头痛动物模型RP-HLPC荧光检测法　　偏头痛是常见病、多发病之一，其发病机制至今尚未清楚。5-HT、儿茶酚胺（去甲肾上腺素及多巴胺）等神经递质早已被提出与偏头痛发作有关。偏头痛前驱期，大量释放的5-HT直接作用于脑膜血管上的5-HT受体，过度收缩脑膜血管;在头痛发作的前期，5-HT水平急剧下降，而尿中5-HT代谢产物增加，使脑膜血管扩张;给予5-

3、HT释放剂芬氟拉明或利血平排空5-HT均能诱发偏头痛，这些事实都支持5-HT的功能紊乱与偏头痛的相关性。同时研究表明偏头痛患者中绝大多数症状可通过刺激多巴胺能系统而诱发，而多巴胺受体，尤其是多巴胺D2受体（DRD2）拮抗剂治疗偏头痛有效，多巴胺-β-羟化酶（D-β-OH）被认为是反应交感活性高低的指标，匡培根［1］及Callai等［2］研究发现，血清D-β-OH不论头痛期还是非头痛期均较对照低，但头痛发作期较间歇期增高。去甲肾上腺素（NA）在偏头痛发作前3h内升高，头痛时下降，血浆水平改变与5-HT相平行。　　临床研究也发现，

4、偏头痛患者外周血5-HT发病先兆期升高，发病高峰时降低，表明体内5-HT有一个由释放到消除的过程，这种5-HT含量的变化是偏头痛发作的主要直接原因，发现单胺类递质耗竭剂利血平能够诱发偏头痛。　　本实验通过参考偏头痛的病因病机及　　2结果　　2.1线性关系考察分别精密称取L-NE5.0mg、L-DA3.8mg、5-HT3.6mg、5-HIAA3.6mg，用0.1mol/LHCl溶解定容至10ml。从中取1ml混合后，用0.1mol/LHCl稀释1000倍摇匀，精密吸取2、4、8、16、32μl进样。以吸收峰峰面积值对含量做线性回

5、归，求得4种递质的回归方程及线性范围分别为，L-NE:Y=3.5458×107X-1.0372×104，r=0.9994，0.001～0.016μg;L-DA:Y=4.8385×107X-1.6525×104，r=0.9996，0.00076～0.01216μg;5-HT:Y=2.554×108X-4.0276×104，r=0.9995，0.00072～0.01152μg;5-HI-AA:Y=3.9053×108X-3.8510×104，r=0.9997，0.00072～0.01152μg。　　表1利血平造模小鼠脑内4种单胺类

6、神经递质的含量（略）　　注:与空白对照组比较，*P<0.05;**P<0.01;***P<0.0001;◇P>0.05　　图1标准品的4种神经递质图谱（略）　　图2样品4种神经递质HPLC图谱（略）　　2.2精密度实验取一定量的混合标准溶液，按拟定方法连续进样6次，测定峰面积。结果L-NE、L-DA、5-HT和5-HIAA变异系数分别为3.58%、3.67%、3.51%和1.93%。　　2.3加样回收率实验取知含量的小鼠脑组织匀浆液200μl，加混合标准液100μl及0.1mol/mlHCl200μl，

7、混匀，从中分别取20、30、40μl混合液各进2针，共6针，照原定的方法进行含量测定，平均回收率L-NE、DA、5-HT、5-HIAA分别为94.72%、95.16%、101.9%、108.73%。　　2.4重复性实验取一定量样品溶液，按拟定方法重复进样测定6次，L-NE、L-DA、5-HT、5-HIAA5种神经递质的RSD分别为3.610%、3.698%、4.432%、4.675%，表明重复性良好。　　2.5稳定性实验取一定量的样品溶液，按拟定的方法在0、1、2、4、8、12h各进1针，结果证明在4h内稳定。L-NE、L-D

8、A、5-HT和5-HIAA变异系数分别为3.176%、1.767%、4.232%、4.117%。　　3讨论　　3.1一般观察0.7剂量组小鼠皮下注射利血平1h后有部分眼眯成线状，不喜动;20h后出现眼睑下垂，眼睛眯成线状，精神不振，动物体温明显下降，四肢震颤，类似寒战，倦缩不