终稿更正)抗金黄色葡萄球菌肠毒素b单克隆抗体的特性与中和保护作用

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1、学校代码：10610学号：S063678四川大学硕士学位论文抗金黄色葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体的特性与中和保护作用CharacteristicsandNeutralizationEffectsofMonoclonalAntibodiesAgainstStaphylococcalEnterotoxinB论文题目_抗金黄色葡萄球菌肠毒素B抗体的制备及其中和作用作者_________康延申康延申_______________学科专业__________细胞生物学___________细胞生物学指导教师__________郭亚军教授魏于全教授郭亚军_教授_______

2、___2009年04月2015日声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。申请人：指导教师：目录中文摘要4ABSTRACT5缩略词表6前言7第一章单克隆抗体的制备10一、材料与方法10二、结果16三、讨论

3、19四、小结20第二章单克隆抗体的体外实验22一、材料与方法22二、结果24三、讨论27四、小结28第三章单克隆抗体的体内试验29一、材料与方法29二、结果30三、讨论33四、小结33第四章SEB抗原表位的筛选与鉴定34一、材料与方法34二、结果41三、讨论46四、小结47第五章双功能抗体的制备及体内外实验49一、材料与方法49二、结果54三、讨论58四、小结59全文小结60主要参考文献62文献综述金黄色葡萄球菌肠毒素B研究进展65其他72致谢73摘要11ABSTRACT22缩略词表33前言44第一部分小鼠抗SEB单克隆抗体的制备77一、材料与方法77二、结果

4、1313三、讨论1717四、小结1818第二部分抗SEB单克隆抗体的体内外中和保护试验1919一、材料与方法1919二、结果2222三、讨论2828四、小结2929第三部分抗SEB识别表位的筛选与鉴定3030一、材料与方法3030二、结果3737三、讨论4242四、小结4545第四部分双功能抗体的制备及体内外中和保护作用4646一、材料与方法4646二、结果5151三、讨论5656四、小结5757全文小结5858参考文献6060综述金黄色葡萄球菌肠毒素B研究进展6363其他7070致谢7171抗金黄色葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体的特性与中和保护作用金黄色葡萄球菌

5、肠毒素B抗体的免疫学特性和保护作用101抗金黄色葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体的特性与中和保护作用金黄色葡萄球菌肠毒素B抗体的免疫学特性和保护作用中文摘要金黄色葡萄球菌肠毒素B（(SEBSEB）)属于热毒素超抗原家族（(SAgs）)。SAgsSEB可通过激活T细胞，使T细胞大量过量增殖并释放大量炎症细胞因子，从而导致中毒性休克综合症及死亡。寻找针对治疗抗SEB被动免疫治疗的研究是目前研究的一个热点SEB引起引发疾病的治疗免疫学方法手段非常必要。本研究论文中我们制备了410株小鼠了抗SEBSEB的单克隆抗体并鉴定了抗体的其理化性质，。4株抗体的并对4株抗体进行了体内

6、外中和保护实验活性。通过噬菌体展示肽段技术鉴定初4株抗体的抗原表位。我们制备了有中和活性的抗SEB的抗体。BIAcore表面等离子共振(SPR)结果显示4株抗体与SEBSEB间有相似的亲和力常数。体内外实验结果分析发现得出发现4A3，，3C1和3E2抗体的中和效果强于1A5抗体。此外还通过噬菌体展示随机肽库技术鉴定了它们的抗原表位。表位筛选图谱分析结果显示提示4A3和3C1的识别表位定位与SEBSEB上与TCR的结合位点区域内；3E2抗体的识别表位定位于SEBSEB上与MHCⅡ分子的结合位点区域内；而1A5抗体的表位定位在MHCⅡ分子结合位点区域附近。最后我们

7、构建通过偶联单克隆抗体3C1和-3E2，制备了同时识别SEBSEB表面TCR和MHCⅡ的双功能抗体3C1-3E2，并证实观察3C1-3E2双功能抗体在体内外具有的功能协同中和作用。实验结果显示3C1-3E2双功能抗体中和SEBSEB的作用效果强于单独使用单克隆抗体单独使用。我们推测：因此，如果两个把两个具有识别不同功能表位的单克隆抗体，融和到一起形成双功能单克隆抗体蛋白，能够同时阻断SEBSEB与TCR和MHCⅡ的结合，潜在的中和SEB的效果的会跟好将具有更有效的中和保护活性，。抗可能SEB双功能抗体有潜力可以成作为一种新颖的免疫学治疗方法候选策略。101抗金

8、黄色葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体的特性与