磁性微粒富集糖蛋白糖肽新方法的研究

《磁性微粒富集糖蛋白糖肽新方法的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、西北大学硕士学位论文磁性微粒富集糖蛋白／糖肽新方法的研究水摘要鉴于糖基化与所修饰蛋白的结构、功能之间及蛋白糖基化程度与细胞健康状态之间的紧密相关性，蛋白质糖基化和糖蛋白质组学的研究越来越受到人们的重视。分离富集糖蛋白／糖肽并对其糖基化位点／糖蛋白进行鉴定成为了蛋白糖基化研究的重点内容。蛋白质组学相关技术已初步应用于糖基化研究中，但糖基化发生的特点决定了它对相关分析技术的高要求性。现有相关分析技术还不够成熟和完备，糖蛋白分析研究要求新的技术突破．本研究对分离富集糖蛋白／糖肽的新方法进行了研究。试验中分别将肼化学和凝集

2、素与磁性微粒(磁粒)相结合，分别制备出了肼功能化磁粒和GNA功能化磁粒，优化了肼功能化磁粒富集糖肽的条件和GNA固定的条件，并通过标准蛋白样品对两种方法的富集特异性和有效性进行了验证．试验表明：两种方法富集糖蛋白／糖肽的特异性和有效性均表现良好．本实验还将肼功能化磁粒富集糖肽方法与糖肽酶酶解、生物质谱等方法相结合，建立起了一套可用于糖蛋白／糖肽分离富集并进行糖蛋白／糖基化位点鉴定的新体系．研究表明，本试验所建立的肼功能化磁粒和GNA功能化磁粒分离富集糖肽方法具有操作简单、分离快速等优点．由于肼功能化磁粒在分离富集糖

3、蛋白的过程中去除了非糖蛋白和糖蛋白中的非高甘露糖型糖蛋白，肼磁粒富集糖肽方法去除了非糖蛋白和糖蛋白中的非糖基化多肽，两者都极大的降低了样品的复杂性，·本课题受国家重点基础研究发展计划(973计划，课题编号No．2004CB520802)及国家高技术研究发展计划(863计划，课题编号No．2007AA022413)资助。西北大学硕士学位论文因而降低了后续数据处理的难度，进而亦有望实现糖蛋白鉴定中的高通量和自动化。本试验为该方法用于糖蛋白组学中复杂样品的蛋白糖基化研究奠定了基础。关键字：磁性微粒；肼化学；凝集素；糖肽；

4、糖蛋白II西北大学硕士学位论文AbstractProteinglycosylationandglycoproteomicsaregrowingfieldsofinterestduetotherelationshipbetweenglycosylationandthestructureandfunctionofglycoproteinsas●wellasthatbetweenglycosylationdegreeandthehealthstatusofcells．Theenrichmentofglycopeptide

5、s／glycoproteinsandidentificationofglycosylationsites／glycoproteinsaleimportantcontentsinglycoproteomics．Manytechnologiesofproteomicshavebeenappliedtotheanalysisofglycosylationprimarily,butthecharacteristicoftheglycosylationdeterminesthehi曲requirementtotheanaly

6、sistechnologies．Sincethetechnologisenowexistedisstillinsufficient，newtechnologiesforglycoproteinsanalysisarestringentnecessity．Herewedevelopedtwonewmethodsfortheenrichmentofglycoproteins／glycopeptides．Bothmethodscombinedthemagneticmicrospherestechnologywithhyd

7、razidechemistryandLectin，respectively．Thehydrazide—functionizedmagneticmicrospheresandGNA·functionizedmagneticmicrospheresarepreparedcorrespondingly．Theconditionforcapturingglycopeptidesbyhydrazide-functionizedmagneticmicrospheresandimmobilingGNAontothemagneti

8、cmicrosphereswasevaluatedandoptimized，andthespecificityandvalidityoftwomethodswasdemonstratedbyusingstandardglycoproteinssample．Theexperimentalresultsshowedthatthespecificityandval