基于功能化纳米材料和生物质谱的糖肽富集与鉴定新技术与新方法

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1、万方数据指导小组成员名单陆豪杰教授熊焕明教授杨苋原教授万方数据㈣圳㈣Ⅷ㈣洲洲删圳咖Y2863393目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯IAbstract．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．⋯⋯．III第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1蛋白质糖基化修饰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ll-1．1蛋白质糖基化修饰的重要意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．．11．1_2蛋白质糖基化修饰的类型⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．1．3糖基化修饰的特点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41．2糖基化研究的技术与方法⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．2．1生物质谱技术概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51．2．2糖基化研究的定性方法⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．71．2．3糖蛋白／糖肽的分离与富集⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯．．．．⋯．．．71．2．3．1凝集素亲和法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．71．2．3．2亲水相互作用法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．81．2．3．3肼腙化学法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．91．2．3．4硼酸富集法．．．．．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯101．2．4糖基化位点的鉴定⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．⋯．．1l1．2．

3、5糖蛋白质组学的技术挑战⋯⋯．．．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．3纳米材料在糖蛋白／糖肽分离与富集技术中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．131．3．1纳米材料的定义与特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．3．2纳米复合材料在糖蛋白质组学中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．．141．3．3纳米聚合物材料在蛋白质组学中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．151．4本论文的选题意义与创新性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17第二章基于两种不同表面功能化纳米材料协同作用富集N_糖基化肽的研究．292．1引言．．⋯⋯．．．．⋯．．⋯⋯⋯．．

4、．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．⋯⋯．．．292．2实验部分．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．302．2．1试剂与原料⋯．．⋯．⋯．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯．．302．2．2两种不同表而功能化纳米材料的合成与表征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l2．2．2．1硼酸修饰的磁性纳米材料Fe。0；@SiO：-APB的合成⋯⋯⋯⋯．312．2．2．2聚甲基丙烯酸甲酯(PMMh)微球的合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯322．2．2．3两种不同纳米材料的表征⋯．．⋯⋯．．⋯⋯．．⋯⋯⋯

5、⋯322．2．3对于标准糖肽的选择性富集的研究．．．．．．．⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯．322．2．3．1标准蛋白溶液酶解⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32万方数据2．2．3．2两种材料协同作用富集糖肽的研究⋯⋯．．．．．．．．⋯．⋯⋯．322．2．3．3MALI)I质谱鉴定⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．342．2．4复杂生物样本中糖蛋Ih／糖肽的富集与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．352．2．4．1正常人血清样本的预处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯352．2．4．2对于N一糖基化肽段的富集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．352．2．4．3LC-MS／MS分析与鉴定．⋯．．．．

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．362．2．4．4数据检索⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．362．3实验结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．372．3．1两种不同表面功能化纳米材料的表征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．372．3．2两种不同材料协同作用于糖肽富集的条件的研究．⋯⋯⋯⋯⋯．392．3．3糖肽富集灵敏度的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯402．3．4糖肽富集选择性的研究⋯⋯．．．⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯．．．．．412．3．5糖肽富集回收率的研究⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯442．3．6糖肽富集容量的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．462．3

7、．7对复杂生物样品中N一糖基化肽的富集与鉴定⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．462．4本章小结⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．47参考文献⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．48第三章基于苯胺功能化磁性纳米材料富集糖肽的研究⋯⋯⋯⋯⋯．．．．633．1引言⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．633．2实验部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．．⋯653．2．1试剂与原料⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯．．．．⋯⋯⋯．．．．⋯．．653．2．2苯胺功能化纳米材料的合成⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．663．2．3苯胺功能化磁性纳米材料

8、用于糖肽选择性富集的研究⋯⋯⋯．．．．673．2．3．1蛋白的溶液酶解⋯⋯．．．．．．．．⋯⋯．．．．⋯⋯⋯．⋯．．．．673．2．3．