mir33a在调控乳腺癌细胞增殖和转移中的功能

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1、厦瞅靴论文著作蝴声明l㈣掣本人同意厦门大学根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办法》等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送交学位论文(包括纸质版和电子版)，允许学位论文进入厦门大学图书馆及其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士、硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文的标题和摘要汇编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。本学位论文属于：()1．经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文，于年月日解密，解密后适用上述授权。()2．不保密，适用上述授权。(请在以上相应括号内打“√”或填上相应内

2、容。保密学位论文应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文，未经厦门大学保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认为公开学位论文，均适用上述授权。)声明人(签名)：彩象白组年月日万方数据摘要摘要背景：微小RNA(microRNA)是一类长度在19—23个碱基、非编码功能的小RNA，在许多生物中都有表达。pri-miRNA在细胞内，经过胞核和胞质中一系列的加工修饰后形成成熟的miRNA。成熟microRNA能够通过与靶基因3’UTR区结合形成近完全或不完全的配对，导致靶基因mRNA降解，从而调控靶基因的表达。随着生物测序技术

3、的发展，目前在人体中己发现2500多个人源miRNA．研究证明miRNA在多种恶性肿瘤生物学功能中起着重要作用。比如：乳腺癌、胃癌、结肠癌、肝癌和肺癌等。乳腺癌是弓l起成年女性死亡最常见的肿瘤之一，已发现有多种miRNA的表达异常。mit爸NA通过调控靶基因影响肿瘤的发生发展是目前的研究热点之一。目的：研究miR-33a在乳腺癌中的生物学功能，寻找miR-33a在乳腺癌细胞中作用的下游靶基因，并探究其作用的机制。方法：(1)通过荧光定量PCR和原位杂交的方法检测miR-33a在23例乳腺癌病理组织样品中的表达情况，又通过荧光定量PCR检测了mi

4、R一33a在乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞株中的表达情况。(2)构建高表达miR-33a的重组质粒载体，通慢病毒转染和筛选获得稳定高表达miR-33a的乳腺癌细胞，荧光定量PCR检测其表达情况。(3)通过体外的MTT实验、平板克隆、Transwell等实验来验证过表达miR一33a对乳腺癌细胞生物功能的影响。同时从反面通过敲低miR一33a来验证miR-33a对乳腺癌细胞生物功能的影响。(4)体内实验通过裸鼠皮下成瘤、尾静脉注射定向肺转移等体内实验来验证过表达miR-33a对乳腺癌细胞成瘤能力和远处转移的影响。(5)在寻找靶基因实验中，结合数据库的预

5、测结果，挑选可能的靶基因，首先通过荧光定量PCR检测这些目的基因在过表达miR-33a的乳腺癌细胞和对照组细胞中的表达情况，挑选其中明显受到过表达miR一33a影响的靶基因，然后通过敲低miR-33a的细胞系进一步验证靶基因，然后进行荧光素酶报告基因实验验证和WesternBlot验证，寻找出miR-33a在乳腺癌中的直接靶基因。结果：(1)荧光定量PCR和原位杂交结果显示miR一33a在乳腺癌病理组织样品中明显低表达，在高转移乳腺癌细胞株中表达量最低。(2)MTT和平板克隆实万方数据摘要验表明在MDA-MB-231细胞株中过表达miR-33a

6、能够明显抑制细胞的增值能力，在敲低miR一33a的MCF一7乳腺癌细胞株中，MCF-7细胞株的增殖能力与对照组相比明显增强。(3)Transwell实验表明在MDA—MB一231细胞株中过表达miR一33a能够明显抑制细胞的迁移和侵袭能力，在敲低miR一33a的MCF一7乳腺癌细胞株中，MCF-7细胞株的迁移和侵袭能力与对照组相比明显增强。(4)小鼠皮下成瘤实验和尾静脉肺定向转移实验，证明过表达miR一33a可以明显抑制乳腺癌增殖和远处转移，低表达miR-33a可以促进乳腺癌的增殖和远处转移。(5)荧光定量PCR结果表明。在过表达和低表达miR

7、-33a的乳腺癌细胞株中，ADAM9，ROSl，SOX9和EGR3基因的表达受到明显影响，然后在通过荧光素酶报告基因实验，过表达miR-33a能够明显抑制ADAM9和ROSl基因的荧光素酶活性，最后的WesternBlot，ADAM9和ROSl在过表达miR-33a的乳腺癌细胞中，蛋白表达明显受到抑制。结论：MiR-33a在乳腺癌细胞中低表达，miR-33a在体外能够明显抑制乳腺癌细胞的增殖和转移能力，在体内能够明显抑制乳腺癌瘤球的形成和远处转移。其作用的机制是通过直接与ADAM9和ROSl基因信使RNA的3’UTR区结合，干扰ADAM9和RO

8、SI表达，抑$[15L腺癌的发生与发展。关键词：miR一33a；乳腺癌；肿瘤增殖；肿瘤转移万方数据AbstractAbstractBackground