谷氨酸及3％nacl对体外培养星形胶质细胞的影响及机制探讨

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1、硕士学位论文中文摘要谷氨酸及3％NaCI对体外培养星形胶质细胞的影响及机制探讨摘要背景星形胶质细胞是神经胶质细胞的主要组分，约占人脑体积的50％。胶质细胞与脑损伤发生发展的关系已受到高度重视。在缺血等病理情况下，星形胶质细胞水肿发生早，也最显著。脑水肿是神经科危重患者常见的一种疾病，也是脑血管病，颅内占位性病变，颅脑损伤和炎症等过程的主要病理生理变化。在围产期脑细胞代谢旺盛，缺氧缺血脑毛细血管内皮受损，细胞膜钠汞机能降低，离子渗透性增加，细胞液随之漏出至组织间隙引起脑水肿，颅内压增高；新生儿由于血脑屏障发育不完善，败血症容易并发细菌性脑膜炎，引起脑水肿颅高压，因此脑水肿一

2、直是威胁新生儿的一种严重的病理生理表现。因此寻找星形胶质细胞引起脑水肿的关系，进而治疗脑水肿成为研究的热点。水通道蛋白4作为水通道家族中的一种，主要分布在脑组织中，在星形胶质细胞高度表达，对维持脑内水平衡至关重要。谷氨酸作为中枢神经系统主要的兴奋性神经递质，当谷氨酸过度激活NMDA受体可引起细胞水肿、坏死和凋亡，在脑缺血、脑外伤及细菌性脑膜炎损伤的发生发展中起重要作用。目前发现高渗钠除降低颅高压、调节免疫抑制、改善微血管灌流等作用外，也有报导能减轻出血性休克后引起的肺损伤，可能存在非渗透保护机制。本实验采用细胞水肿模型，研究谷氨酸受体NMDA与AQP4之间的机制，同时用L

3、PS诱导AS损伤模型进行高渗钠保护机制的探讨。目的探讨谷氨酸及高渗钠对体外培养星形胶质细胞的影响及机制。硕士学位论文中文摘要第一章谷氨酸及其受体在星形胶质细胞水肿中的作用及机制研究方法将体外培养好的AS分为空白对照组、Glu组(O．immmol／L)、NMDA组(O．immmol／L)、MK一801组(0．Olmmol／L)、GIu+MK一801组和NMDA+MK-801组。后两组先加入MK一801预处理30分钟后再加入Glu或NMDA。各组在试剂加入2d'时后终止实验进行免疫组化、MTT、LDH、Ca2+、Na+-K+．ATP酶活力、细胞形态及Rea卜TimePCRAQ

4、P4InIiNA和流式AQP4测定。结果1．免疫组化细胞原代培养后继续传代至第四代，进行免疫组化鉴定，AS纯度达98％以上。2．细胞存活率和细胞培养液中LDH含量各组之间细胞的存活率和细胞培养液中LDH含量均无统计学差异，表明本研究所用浓度未引起细胞的细胞膜损伤、也未引起细胞死亡。3．细胞形态学变化：Glu和NMDA可引起细胞的周长、面积和体积均明显增加(p

5、

6、致AQP4的变化(P

7、确定本研究3％NaCl的最佳干预时间。2．确定LPS最佳浓度和最佳作用时间：将AS细胞分为空白对照组和LPS组。LPS组根据其浓度进一步分为：lug／ml组、10ug／ml组、100ug／ml组，在培养6小时、12小时、24小时后分别终止实验进行MTT检测，确定LPS诱导AS损伤的LPS的最佳浓度和作用时间。3．观察3％NaCl对LPS诱导AS损伤的保护作用和可能的机制：细胞分为空白对照组、LPS组、3％NaCl组、甘露醇组。3％NaCl组和甘露醇组分别用3％NaCl和甘露醇预处理15分钟后，再加入含有LPS(100ug／m1