改良人的垂体瘤培养以及il-6对垂体瘤垂体功能紊乱的影响

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1、硕士学位论文改良人的垂体瘤培养以及IL．6对垂体瘤垂体功能紊乱的影响硕士研究生：李煜指导教师：彭玉平教授漆松涛教授’僚松搿教役摘要第一部分：改良人的垂体瘤培养研究背景垂体腺瘤是一类具有内分泌功能的肿瘤，其发病率在颅内肿瘤中仅次于胶质瘤和脑膜瘤。按肿瘤直径大小分类，S1cm者称为微腺瘤；1～4cm为大腺瘤：>4cm为巨大腺瘤。而巨大垂体腺瘤常常累及单侧甚至双侧海绵窦区域，通过神经外科手术完全切除且保护其相应神经功能完整性，相对困难，此时需要借助药物或立体定向反射治疗，方能达到治疗目的。而垂体腺瘤根据病理类型分类可分为：生长激素(GH)细胞腺

2、瘤；催乳素(PRL)细胞瘤；促肾上腺皮质激素(ACTH)细胞腺瘤；促甲状腺素(TSH)细胞腺瘤；促性腺激素(LH／FSH)细胞腺瘤；混合性腺瘤；无分泌功能的细胞腺瘤7种。泌乳素腺瘤和生长激素腺瘤目前尚存在有效药物可以进行内科治疗，但其他类型垂体腺瘤，尤其是无功能型垂体腺瘤，尚没有有效药物。因垂体腺瘤为良性肿瘤，生长缓慢，原代培养困难，一方面是，因为垂体腺瘤的生长可能与肿瘤细胞与正常垂体细胞之间激素的支持环境有关，在体外培养脱离了垂体所在的门脉系统血供的支持以及激素的影响，可能影响了垂体腺瘤的生长。另一方面，因人垂体瘤培养体系内常常混有大量

3、成纤维细胞，垂体腺瘤的生长要求较成纤维细胞高，在培养一段时间后，培养体系内大量的成纤万方数据摘要维细胞甚至取代垂体瘤细胞。并且经过多年的研究，人垂体瘤细胞系的建立举步维艰，Jin等川利用SV40病毒，通过转染的方式，尝试建立人垂体瘤细胞系HP75，但该细胞系仅保留了部分垂体瘤细胞的特性，并未得到广泛应用。在过去的几十年里，全世界学者针对垂体瘤的基础研究模型主要使用的是大鼠的垂体瘤细胞系GH3，ATT20等[2。6】。长期，稳定，高纯度的人垂体腺瘤培养方式一直是众多学者的研究目标。对于垂体瘤培养的研究，国外研究主要有llonaFazekas

4、等学者17’引，多年培养垂体腺瘤细胞并总结不同类型的垂体腺瘤培养的特点，其中生长激素型腺瘤和促肾上腺型腺瘤相对培养较易，而泌乳素型腺瘤和无功能性腺瘤相对培养较困难。GH腺瘤，ACTH腺瘤及嗜酸性干细胞腺瘤贴壁，迁移及生长较好。PRL腺瘤和无功能性腺瘤活性较差。迁移缓慢而罕见，贴壁非常慢，且细胞核不规则，胞浆内细胞器不良，激素分泌颗粒较小。Ishiwata等学者【9]认为在培养过程中成纤维细胞难以和垂体腺瘤细胞完全分离，若不分离成纤维细胞，则成纤维细胞呈优势生长，逐渐取代培养体系内的垂体腺瘤细胞，导致培养失败。但同时也有学者认为，成纤维细胞

5、最初对垂体瘤细胞起着一个滋养层的作用¨0J但最终会限制垂体瘤细胞的生长。如何抑制成纤维细胞一直是垂体瘤培养研究领域的热点。对于这一问题Auda—BoucherG等人尝试利用含有D．valine的培养液进行培养，从而抑制成纤维细胞的生长]。国内研究主要有徐伟光和寿雪飞等学者对垂体瘤培养方式的研耕12，131，大部分学者都主张将垂体腺瘤用多聚赖氨酸等方式，粘附于培养皿底部，单层培养，因单层培养在换液过程中不易造成细胞的损失，并且细胞平铺于培养皿底部，有利于观察细胞形态和结构。但将垂体腺瘤用多聚赖氨酸粘附于培养皿底部，出现成纤维细胞时，难以将二

6、者分离，无法实现最大程度抑制成纤维细胞的目的。垂体腺瘤起源于外胚层，属上皮来源，而成纤维细胞常起源于中胚层的间质起源组织。细胞角蛋白常表达于上皮来源的细胞或组织，在角质细胞中主要为骨架蛋白。其功能一方面是维持上皮组织结构的完整及连续性，另一方面与上万方数据硕士学位论文皮的增殖分化有密切关系。研究发现，细胞角蛋白具有较高的组织分化特异性及保守性，有研究表明细胞角蛋白在20多种上皮来源的细胞中pIt'陛表达[14】。波形蛋白常表达于问质来源的细胞中，并且儿乎所有正常的问质细胞中均存在波形蛋白的表达。波形蛋白的主要功能是一方面在应急损伤中有重要

7、作用，另一方面，波形蛋白具有较强的弹性和灵活性，能够弥补微管及肌动蛋白所不具备的弹性，所以，波形蛋白还具有维持细胞组织结构完整性的功能。在波形蛋白基因敲除的小鼠实验中，因波形蛋白不表达，虽然小鼠机体功能运转正常，但因波形蛋白缺失导致脂蛋白转运障碍。当出现这种转运障碍时，细胞内无法累积脂蛋白，因这个过程需要机构功能完整的中间丝网参与。并且波形蛋白在肾上腺细胞中也有重要作用，可以完成肾上腺中低密度脂蛋白生成胆固醇酯的过程[151。传统垂体瘤细胞培养研究，大多都首先将悬浮生长的垂体瘤细胞变为贴壁生长，再进行后续的增殖与传代。但是这样的平面2D培

8、养体系并不能很好的模拟实体肿瘤的微环境，BisselMJ的团队认为2D平面培养会让培养的细胞丧失许多信号通路，在培养过程中尽可能还原细胞自然结构，对细胞间信号交换至关重要116-18】。在体内