雌激素对成骨细胞凋亡及相关因素表达影响的实验分析

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1、雌激素对成骨细胞凋亡及相关因素表达影响的实验研究研究生：唐孝明导师：裴福兴教授摘要目的：探讨雌激素对体外培养的大鼠成骨细胞凋亡和凋亡相关基因Bcl一2、Bax和Fas表达的影响，为明确雌激素治疗骨质疏松的机理提供依据。方法：(1)体外培养新生sD大鼠颅骨成骨细胞，并从形态学、硷性磷酸酶染色等方面予以鉴定。(2)取生长旺盛的第2．3代成骨细胞随机分为对照组、血清饥饿组、血清饥饿+雌激素组、脂多糖组和脂多糖+雌激素组等5组，每组细胞分别培养24、48、72小时、5天、7天、14天后作检测。(3)上述5组细胞培养72小时后作吖啶橙染色、TUNEL

2、染色观察凋亡细胞的形态特征。(4)流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率，并比较组间的差异性。(5)免疫组化方法检查各组细胞凋亡相关基因Bcl一2、Bax和Fas的表达情况，比较组间各基因表达的差异性。结果：(1)培养出来的细胞具有成骨细胞的形态特征，硷性磷酸酶染色为阳性。(2)吖啶橙染色荧光显微镜观察，血清饥饿和脂多糖组细胞见细胞核呈黄绿色浓染、并可见凋亡小体，血清饥饿+雌激素组和脂多糖组+雌激素组细胞正常。(3)TUNEL染色见血清饥饿和脂多糖组细胞核内有紫兰色颗粒的凋亡细胞，而血清饥饿+雌激素组和脂多糖组+雌激素组该类细胞明显减少。(4)流式

3、细胞仪检测发现血清饥饿和脂多糖组细胞凋亡率显著升高，血清饥饿+雌激素组和脂多糖组+雌激素组细胞凋亡率显著降低。(5)血清饥饿和脂多糖组Bax和Fas的表达显著升高，而血清饥饿+雌激素组和脂多糖+雌激素组Bax和Fas的表达显著降低，且Bcl—2的表达显著升高。结论：雌激素能抑制血清饥饿和脂多糖诱导的大鼠成骨细胞凋f2；血清饥饿和脂多糖通过增加成骨细胞Bax和Fas的表达促进成骨细胞凋亡，雌激素能抑制成骨细胞Bax和Fas的表达，并能促进Bcl一2的表达从而抑制血清饥饿和脂多糖诱导的大鼠成骨细胞凋亡。关键词雌激素成骨细胞细胞凋亡基因EFFEC

4、TOFESTOGENONOSTEOBLASTAPOPTOSISANDEXPRESSIONOFRELATEDGENESPostgraduate：TangXiaoMingTutor：ProfPeiFuXingABSTRACTObjecfive：mordertofindwhyestrogencantreatosteoporoticpatients，theeffectsofestrogenonosteoblastapoptosisandexpressingofapoptoficgeneswerestudied．Methods：(1)Osteobla

5、stsw盱eculturedfromnewlybornSDratscalvaria,andconfirmedbymorphologicalobservationandalkalinephosphatase(AKP)staining．(2)OsteoblastsofsecondorthirdgenerationweTedividedrandomlyintofivegroups，naraelycontrolgroup、Berumhungry、serulnhungrywithes打ogen．1ipopolysaccharideandlipopol

6、ysaecharidewithestrogengroup，cellsofeachgroupwereincubatedfor24、48h、72h、5d、7d、14d，thenWeretakenoutforexamination，(3)cellsofeachgroupwerelabeledusingthenucleicacid-binddyeacridineorangeandwereexaminedformorphologicalcharacteristicsofapoptoticcellbyfluorescencetightmicroscop

7、yafterincubatedfor72h,morPhologicalcharacteristcsofapoptoticcellsWerOalsoexaminedwithTUNELstaining．(4)theratesofapoptoticcellsofeachgroupwereexaminedwithflowcytometry,andwerecomparedtofindifthereweresignificantlydifferencebetweengroups．(5)immunohistochemicalmethodswereused

8、toexaminedtheexpressionOfapoptoticgenesBcl-2、BaxandFasofeachgroup,theexpressingratesofapo