葛根对成骨细胞opg、rankl mrna 表达的影响

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1、葛根对成骨细胞OPG、RANKLmRNA表达的影响作者：吴乃中，李红丽，崔淑云【摘要】目的本研究用RT-PCR的方法观察葛根中药血清对成骨细胞细胞因子：OPG、RANKLmRNA表达的影响，力求从细胞水平和分子水平对葛根抗骨质疏松的机制进行探讨，为葛根应用于临床防治骨质疏松提供有力的实验依据。方法将(250±10)g的SD大鼠36只，随机分为两组：对照组灌服生理盐水，中药组灌服2g/ml的葛根10ml/kg·d，1日2次灌胃，连续3天，最后一次灌胃后中药组和对照组分别1h、2h、4h无菌操作股动脉采血，收集血清备用。出生24h内的SD大鼠，无菌取颅盖骨，做成骨细胞培养。第三代成骨

2、细胞5×104/ml细胞悬液，24h待细胞贴壁后加入实验因素，6天后用异硫氰酸胍一步法提取总RAN，然后用RT-PCR检测OPG、RANKLmRNA的表达。结果最后一次用药后2h采血的中药血清可明显上调成骨细胞OPGmRNA表达，且明显下调成骨细胞RANKLmRNA的表达。随血清添加量的增加，对成骨细胞OPGmRNA表达上调作用越强，对成骨细胞RANKLmRNA的表达无影响。结论实验表明，葛根可能通过上调成骨细胞OPGmRNA的表达，下调成骨细胞RANKLmRNA的表达，抑制破骨细胞的产生和功能，为葛根防治骨质疏松提供了有力的实验依据。【关键词】葛根；成骨细胞；OPG；RANKL

3、【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofrootsofkudzuvineonthemRNAexpressionofOPGandRANKLofosteoblastsusingRT-PCR.ToprovidetheexperimentalbaseforitspreventingandtreatingtheOPinclinic，itisurgenttoexplorethemechanismofrootsofkudzuvineanti-osteoporosisincellandmolecularlevel.Methods36SDratslydivi

4、dedintotinisteredorallyediumsagittatummaxim（2g/ml）tl/kgbodythefemoralarteryatonehour，tinistrationofmedicine.Primaryratosteoblastsneousecalvariae.Thethirdpassageosteoblastslin75mlcultureflask，tentfactorsosteoblastsusingguanidine，andmRNAexpressionofOPGandRANKLinedusingRT-PCR.ResultsSerumofroots

5、ofkudzuvinecanup-regulatemRNAexpressionofOPGofosteoblastsanddoRNAexpressionofRANKLofosteoblasts.Theeffectofserumofmedicineharvestedat2hafterthelastmedicineadministrationisthemoststrongandtheeffectforOPGanner，hoanner.ConclusionTheexperimentshoightinhibitthegenerateandfunctionofosteoclastbyup-r

6、egulatingthemRNAexpressionofOPGanddoRNAexpressionofRANKL.IthasprovidedtheexperimentbaseforrootsofkudzuvinepreventingandtreatingtheOPinclinic.【KeyRNA表达的影响，力求从细胞水平和分子水平对葛根抗骨质疏松的机制进行探讨，为葛根应用于临床防治骨质疏松提供有力的实验依据。1材料与方法1.1实验动物出生24h内的SD大鼠，(250±10)gSD大鼠，由河北医科大学实验动物中心提供。1.2药物与试剂葛根（购于保定市第三中心医院），DMEM培养基（

7、GiBco），胰蛋白酶（GiBco），Ⅱ型胶原酶（Sigma），新生小牛血清（NCF）（北京鼎国生物试剂公司），RT-PCR试剂（北京赛百盛基因技术公司），PCR引物：OPG(genebank：NM-012870)北京赛百盛基因技术公司合成，上游引物：5′-CGAGTGATGAATGCGTGTA-3′下游引物：5′-TTCTGAAGTAGCAGGAGGC-3′扩增产物为301bp；OPGL(genebank：NM-057149)北京赛百盛基因技术公司合成，上游引物：5′-CCAT