nrf2are信号通路对ⅰ型糖尿病小鼠肾脏氧化应激的影响及其作用机制的研究

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1、目录中文摘要l英文摘要6英文缩写13研究论文Nrf2一ARE信号通路对I型糖尿病小鼠肾脏氧化应激的影响及其作用机制的研究引言14第一部分Nrf2．ARE信号通路在糖尿病小鼠肾脏的表达及其与糖尿病肾脏氧化应激损伤的关系前言刚舌··”一·一616一材料与方法17结果26附图28附表35讨{仑···36／J、结38，参考文献38第二部分Nrf2一ARE信号通路对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响前言日U吾·”“‘4～1材料与方法42结果··········“53附图57附表70讨{仑···········

2、···-··········“7l小结················一73参考文献73第三部分激活Nrf2．ARE信号通路对糖尿病小鼠肾小球氧化应激的影响前言····剐舌”“”“···一”·“一．·一一“”·”／6‘O材料与方法77结果·······”···81附图83附表90讨论··················92小结······················”······94参考文献94结{仑··········································一····96综述一

3、氧化应激在糖尿病肾病发病机制中的作用97综述二机体抵抗氧化应激的信号转导通路—-Nrf2．ARE107致谢························l18个人简历0000000Q00·O0000QO000119中文摘要Nrf2．ARE信号通路对I型糖尿病小鼠肾脏氧化应激的影响及其作用机制的研究摘要目的：糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病常见的微血管并发症，也是糖尿病致死、致残的重要原因。DN早期病理特征是肾小球肥大、基底膜增厚和系膜扩张，晚期则表现为肾小球硬化和间质纤维

4、化。细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)过度积聚是DN发生的病理生理基础。研究表明，氧化应激(Oxidativestress)在DN发病中起重要作用，高糖状态下产生过多的活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)不但激活了几乎所有已知的与糖尿病微血管并发症发生发展有关的信号传导通路，如PKC通路，多元醇通路，氨基己糖通路及AGEs形成，还可激活NF—KB上调黏附分子及炎性因子的基因转录，这是包括DN在内的糖尿病微血管并发症发病的共同机制。以上异常情况的长期存在使肾小

5、球系膜基质及基底膜合成增加、降解减少，导致DN的发生发展。机体在应对ROS损害时形成了一套复杂的氧化应激应答系统，当暴露于ROS时，机体自身能诱导出一系列保护性蛋白，以缓解细胞所受的损害。这一协调反应是由这些保护性基因上游调节区的抗氧化反应元件(antioxidantresponsiveelementARE)来调控的。而近年来的研究发现，核因子NF—E2相关因子(Nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2，Nrf2)是ARE的激活因子。Nrf2是外源性有毒物质和氧化应激的感

6、受器，在参与细胞抗氧化应激和外源性有毒物质诱导的主要防御机制中发挥重要的作用。Nrf2一ARE通路是迄今为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路。国内外对于Nrf2／ARE通路的研究主要集中在抗环境应激、抗老化、抗凋亡、神经保护和抗肿瘤等方面，而此通路在糖尿病氧化应激中的作用的研究未见到报道。机体内氧化还原水平失衡是糖尿病肾病的病理生理基础，调节体内抗氧化蛋白水平是改善其病理变化的策略之一，不同于以往的外源性抗氧化剂，Nrf2～ARE抗氧化系统是调控多种抗氧化酶转录表达的关键内源性通路，对于此通路的调控为实

7、现有效、适度抗氧化治疗提供了新思路。本中文摘要实验拟在整体与细胞水平，研究ONrf2／ARE通路是否参与DN中的氧化应激反应；②通过增强Nrf2蛋白表达，是否可以减轻DN的氧化应激损伤，从而延缓DN的发生发展，试图为糖尿病肾病的防治提供可靠的实验依据。方法：l糖尿病动物模型的建立及相关指标检测右肾切除的雄性CD一1小鼠随机分为二组：对照组(C组)，糖尿病组(DM组)。糖尿病组小鼠按130mg／kg腹腔注射STZ(溶于0．1tool·L一1枸橼酸缓冲液中，pH为4．5)，对照组注射等体积枸橼酸缓冲液。72小时

8、后尾尖取血测定血糖，留尿测尿糖，以血糖≥16．7mol／L、尿糖(+++)～(++++)作为糖尿病模型成功的标志。分别于注射STZ后4周、12周每组取6只小鼠称重后分别用代谢笼收集24h尿，用于测定尿白蛋白(Ualb，于四周时)和尿蛋白(Upro，于12周时)；股动脉取血，分离血清，用于测定血生化和血清丙二醛(malondialdehyde，MDA)浓度；切取肾脏用于常规病理及免疫组化检测Nr亿、HO—l、Y．G