i3k在l选择素和psgl1信号通路中的作用研究

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1、fIlfffIrlIrllIIIIfilll＼1806037独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下独立进行研究工作所取得的成果。据我所知，除了特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。对本人的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明。本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：学位论文使用授权书本学位论文作者完全了解东北师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：东北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权东北师范大学可以将学位论文的全部

2、或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编本学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)日期：翟1212：竺日期：差学位论文作者签名澎量壁塾指导教师签名：学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：4‘1/摘要在许多病理或生理条件下，白细胞将跨越血管内皮，迁移到下层组织从而离开血液，这一过程称为白细胞跨内皮迁移(TEM)。目前已经明确，白细胞和内皮细胞上的许多粘附分子以及调控粘附和趋化的胞内信号分子参与了白细胞的跨内皮迁移。一方面，这一过程需要调控血管内皮的完整性。另一方面，血液中的白细胞需要被血管内皮捕获、沿

3、血管内皮滚动、粘附并穿越血管内皮，最终到达炎症部位。参与白细胞跨内皮迁移的粘附分子主要有两类，即选择素家族分子和整合素家族分子。其中，L一选择素和PSGL-1分别是一种选择素和选择素配体。它们均组成性地表达于白细胞微绒毛顶端，在白细胞跨内皮迁移过程中最先接触血管内皮。因此，L一选择素和PSGL-1在白细胞跨内皮迁移的起始粘附阶段起关键作用。事实上，它们不仅能够识别并结合表达在活化的内皮细胞表面的相应配体，使白细胞在快速流动的血液中减速，还能够作为信号受体向白细胞内转导并放大炎症信号，为白细胞和血管内皮之间建立稳定粘附做准备。有关L一选择素和PSGL一1信号通路

4、的研究有很多。通过对比研究L一选择素和PSGL-1所引起的信号通路，我们发现二者作为两种不同的信号分子，虽然其胞浆尾部的氨基酸序列同源性很低，但是其信号通路却有很多相似性。二者的胞浆尾部都可以通过ERM蛋白和细胞骨架结合；二者都可以通过胞浆尾部募集信号复合体，引起CSF一1的表达上调。在某些条件下，L一选择素和PSGL-1甚至可以通过协同作用而相互补偿其生理功能。然而，目前还没有明确L一选择素和PSGL-1如何引起相似的信号途径，也没有找到这两条信号通路的整合点。在研究哪种激酶作为L一选择素和PSGL-1信号通路的关键整合点起作用时，我们注意到了P13K这种特

5、殊的激酶，它可以将磷脂酰肌醇(4，5)7-磷酸磷酸化为脂类第二信使磷脂酰肌醇(3，4，5)三磷酸，从而参与调控细胞骨架和基因转录调控。我们的研究表明，在白细胞跨内皮迁移的起始粘附阶段，L一选择素和PSGL-1可以作为E一选择素的配体，引起F一肌动蛋白的聚合和重新分布，从而维持白细胞在E一选择素上的滚动。P13K在L一选择素和PSGL—l受到E一选择素刺激后被迅速活化，在刺激5分钟时活性最强，在刺激10分钟时仍然能够检测到其活性。活化的P13K能够活化下游的细胞骨架调控者-Vavl，P13K的特异性抑制剂LY294002能够抑制E一选择素刺激引起的Vavl的活化

6、。P13K活化后通过调控F一肌动蛋白聚合和重新分布来参与中性粒细胞在E一选择素上的滚动。但是P13K经典的上游激酶Syk／Zap70不参与P13K的活化。此外，我们以JurkatT细胞为材料，通过体外共转染和RealtimePCR实验证明L一选择素和PSGL-1还能够引起IL—18的表达，从而为L一选择素和PSGL一1作为信号受体参与白细胞活化提供了证据。P13K也参与了L一选择素和PSGL-1抗体交联所引起的IL-18基因的表达。综上所述，我们的实验首次表明，L一选择素和PSGL-1可以通过P13K作为二者信号通路的关键整合点之一，参与调控细胞骨架和前炎症基

7、因IL-18基因的表达，进而在白细胞跨内皮迁移和白细胞活化过程中起关键作用。关键词：中性粒细胞滚动；细胞骨架；L一选择素；PSGL一1；P13K；IL一18IIAbstractUndernumerouspathologicalorphysiologicalconditions，leukocyteswilltransmigratethroughtheendotheliumcleftstotheunderlyingtissue，andthisprocessiscalledleukocytetransendotheliummigtation(TEM)．TillnOW

8、，itisknownthatmanya