谷氨酸信号通路在表皮细胞伪足形成及黑素小体转运中的作用研究

谷氨酸信号通路在表皮细胞伪足形成及黑素小体转运中的作用研究

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1、谷氨酸信导函路在表皮细胞伪足形成及黑素,J唰睬躯中的作用研究计:学位论文:33页表格:0个插图:12幅王楠指导教师:宋智琦教授申请学位级别:硕士学位论文提交日期:2012年4月学位授予单位:大连医科大学专业名称:皮肤病与性病学论文答辩日期:2012年5月学位授予日期:2012年6月评阅人:答辩委员会主席:独创性声明\删本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在

2、论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:圭确签字E1期:韭年三月且日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)丹!J舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯“⋯⋯⋯“5(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33谷氨酸信号通路在表皮细胞伪足形成及黑素小体转运中的作用研究硕士生姓名:王楠指导教师:宋智琦专业名称:皮肤病与性病学摘要目的:探讨谷氨酸信号通路在黑素细胞及角质形成细胞伪足形成及黑素小体转运中的作用机制。方法:

4、1原代培养并纯化黑素细胞、角质形成细胞。2.扫描电镜观察离子型谷氨酸受体N.甲基.D一天冬氨酸受体fN-methyl·D·aspartatereceptor,NMDAR)非竞争性拮抗剂地卓西平(dizocilpine,MK.801),激动剂(N.Methy-D—asparticacid,NMDA)作用下黑素细胞、角质形成细胞的伪足形态变化。以31lnmUVB对黑素细胞伪足形态的影响的观察作为阳性对照。3建立黑素细胞和角质形成细胞体外共培养体系;扫描电镜观察共培养体系下,MK801、NMDA作用后细胞伪足形态的变化。4免疫荧光双染色,激光共聚焦显微镜下观察MK801、NMDA对黑素小体的转运的调

5、节作用。结果:1扫描电镜下观察发现黑素细胞在拮抗剂100}tMMK801作用24h后黑素细胞树突末端明显变细、树突变长,细胞表面伪足数量明显变少,且伪足长度变短;激动剂lOOp,MNMDA作用黑素细胞24h后发现细胞树突的末端明显变宽、树突变短,表面伪足数量明显增多,并且伪足长度变长。黑素细胞之间没有丝状伪足互相联系。角质形成细胞在1001J.MMK801、1001xMNMDA作用24h后细胞形态及表面伪足较对照组无明显变化。2.黑素细胞与角质形成细胞共培养体系中,黑素细胞与角质形成细胞间有丝状伪足相连接,黑素细胞上靠近角质形成细胞方向的丝状伪足数量多于反方向。3.100/aMMK801作用于

6、共培养体系24h后,黑素细胞和角质形成细胞之间的丝状伪足连接数量及黑素细胞伸向角质形成细胞的丝状伪足数量减少;100}tMNMDA作用于共培养体系24h,黑素细胞和角质形成细胞之间的丝状伪足连接数量及黑素细胞伸向角质形成细胞的丝状伪足数量增多。4.共培养体系下,激光共聚焦显微镜观察NⅪ/BETEB抗体标记的黑素小体、细胞角蛋白14抗体标记的角质形成细胞,发现在角质形成细胞中存在黑素小体。经]ooⅢ'vlMK801作用24h后角质形成细胞中的黑素小体数量减少,100pMNMDA作用24h后角质形成细胞中的黑素小体数量增多。且与黑素细胞不相邻的角质形成细胞中也发现黑素小体的存在。结论:1抑制谷氨酸

7、受体NMDAR可使黑素细胞树突末端变窄、树突变长,黑素细胞表面的伪足数量减少、伪足长度变短;激动谷氨酸受体NMDAR可使黑素细胞树突末端变宽、树突变短,黑素细胞表面伪足数量增多、伪足长度增加。激动或抑制谷氨酸受体NMDAR对角质形成细胞影响不大。2黑素细胞和角质形成细胞共培养体中,抑制谷氨酸受体NMDAR可以使黑素细胞和角质形成细胞之间的丝状伪足连接数量减少:激动谷氨酸受体NMDAR可以使黑素细胞

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