谷氨酸受体非竞争性拮抗剂及激动剂调节表皮细胞伪足形成及黑素小体转运的观察.pdf

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1、中华皮肤科杂志2013年l2月第46卷第12期ChinJDermat0l。December2013．V01．46．No．12871·论著·谷氨酸受体非竞争性拮抗剂及激动剂调节表皮细胞伪足形成及黑素小体转运的观察王楠宋智琦【摘要】目的探讨谷氨酸信号通路在黑素细胞及角质形成细胞伪足形成及黑素小体转运中的作用机制。方法原代培养并纯化黑素细胞、角质形成细胞，建立黑素细胞与角质形成细胞体外共培养体系。扫描电镜观察离子型谷氨酸受体N一甲基一D一天冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK801及激动剂NMDA作用下黑素细胞、角质形成细胞的伪足形态变化，以311nm中波紫外线(UVB)照射为阳性对照。免疫荧光

2、双染色激光共聚焦显微镜下观察MK801及NMDA对黑素小体转运的调节。结果扫描电镜观察发现，100Ixmol／LMK801作用24h后黑素细胞树突末端明显变细，树突变长，树突数量无明显变化而细胞表面的丝状伪足数量明显变少，且伪足长度变短；100~mol／LNMDA作用24h后黑素细胞树突的末端明显变宽、树突变短，树突数量无明显变化而细胞表面丝状伪足数量明显增多，丝状伪足长度增加。黑素细胞与角质形成细胞共培养体系中，未用药组黑素细胞与角质形成细胞间有丝状伪足相连接，黑素细胞的角质形成细胞侧丝状伪足数量多于对侧。100Ixmol／LMK801作用于共培养体系24h后，黑素细胞与角质形成细胞之间的丝

3、状伪足数量及黑素细胞伸向角质形成细胞的丝状伪足数量减少；100b~mol／LNMDA作用于共培养体系24h后，黑素细胞与角质形成细胞之间的丝状伪足数量及黑素细胞伸向角质形成细胞的丝状伪足数量增多。激光共聚焦显微镜观察显示，共培养体系下，未用药组角质形成细胞中存在黑素小体；100p~mo]／LMK801作用24h后角质形成细胞中的黑素小体数量减少；100p~mol／LNMDA作用24h后角质形成细胞中的黑素小体数量增多，且与黑素细胞不相邻的角质形成细胞中也发现黑素小体存在。结论谷氨酸信号通路可能通过调节黑素细胞树突的形态及丝状伪足的形成参与调节黑素小体自黑素细胞至角质形成细胞的转运。【关键词】角

4、蛋白细胞；黑素细胞；谷氨酸；伪足；黑色素小体；树突Noncompetitiveantagonistsandagonistsofglutamatereceptorregulatefilopodiaformationinepidermalcellsandmelanosometransfer：anexperimentalstudyWANGNan．SoNGzhi—qi．DepartmentofDermatology,FirstAmliatedHospital,DalianMediemUniversity,Daliann6o2l。ChmaCorrespondingautho17SONGZhi．qi．Em

5、aihszqdalian@yahoo．corn【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheregulatoryeffectofglutamatesignalingpathwayonfilopodiaformationinepidermalcellsandonmelanosometransfer．MethodsEpidermalmelanocytesandkeratinoeyteswereisolatedfromhumanforeskinandsubiectedtosubculture．Aftertwotothreepassagesofsubculture，themel

6、anocytesandkeratinocyteswereculturedaloneorincombinationwithorwithoutthepresenceofMK801(anantagonistofN—methyl—D．aspa~icacid(NMDA)receptor)of100／xmol／LorNMDA(theactivatorofNMDAreceptor)of100Ixmol／L,for24hours．ThemelanocytesirradiatedwithUVBat311amservedasthecontro1．Scanningelectronmicroscopywasusedt

7、oobservetheappearanceoffilopodiaanddendritesofmelanocytesandkeratinocytes．Melanosometransferwasvisualizedunderconfocallaserscanningmicroscopyafterdoubleimmunofluorescentstaining．ResultsAlthoughnoobvio