耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制探析

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1、耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制探析海青山(内蒙古呼伦贝市中蒙医院检验科021000)【中图分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2013)06-0421-01【摘要】目的通过对菌株的检验来对鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药机制进行探讨。方法在临床中要先对耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌进行分离，细菌鉴定釆用法国梅里埃ATB半自动细菌鉴定仪，药敏选用KB纸片法与药敏上机板条相结合，三维试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR检验方法检测耐药基因，PCR阳性产物进行基因测序。结果通过与基因库的比对可以发现，所选的6株鲍曼不动杆菌大多数是多重耐药菌株，在三维试验中，此类菌株

2、均产牛了ESBLs,有4株菌株产牛了AmpC酶。在6株鲍曼不动杆菌的耐药基因型检测中发现有4株AmpC酶阳性，6株均为TEM阳性，4株为PER阳性，4株为0XA-24>VIM、IMP和VEB型等均为阴性，6株OXA-23型均阳性。结论耐亚胺培南鲍曼不动杆菌有OXA・23型碳青霉烯酶基因，OXA・23型碳青霉烯酶是主要耐药机制。【关键词】耐药基因型OXA-23型碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌多重耐药菌株由于细菌的耐药性不断提高，常规的抗菌药已不能对多重耐药菌株进行有效的抗感染治疗。这给临床的治疗带来了较大的困难［1］。鲍曼不动杆菌的耐药机制较为复杂，例如对修饰酶、B-内酰胺酶、膜孔蛋白缺损

3、、外膜蛋白的丢失等机制的研究困难较多。木文主要选择我院2009年1月〜2012年1月期间分离的62株确诊为鲍曼不动杆菌的细菌对其耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药机制进行检验。1、材料与方法1.1菌株来源选择我院2009年1月〜2012年1月期间分离的62株经半自动ATB细菌鉴定仪确诊为鲍曼不动杆菌的标木，其中有6株是对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌：200901151、201006202、、201012053、201110112>201201241c这6份菌株分别来源于ICU2份、呼吸科2份、脑外科1份、CCU1份。所有的菌株均通过半自动ATB微生物鉴定仪进行了鉴定。1.2标准菌株高产A

4、mpC酶阴沟肠杆菌和TEM-26型大肠埃希菌与鲍曼不动的标准菌株及肺炎克雷伯菌ATCC700603和大肠埃希菌ATCC25922由本院实验室进行保存。原标准菌株均购自中国疾控CDC中心。1.3主要仪器：上海艾测电子科技有限公司生产的PCR仪器、检测细菌的设备是法国梅里埃的半自动ATB、珠海TGL-16R高速冷冻离心机、海尔DW-40L92型低温冰箱、济南鑫贝西BSC-1100IIB2型生物安全柜、上海博迅SPX-100B-Z型细菌培养箱、北京六一DYY11B型电泳仪。1.4药敏检验现有的检测细菌的设备是法国梅里埃的半自动ATB,试剂也是梅里埃的试剂，鉴定均为上机试剂板条。药敏为手

5、工KB纸片法与上机板条相结合。手工纸片有：磺胺异恶畔为英国Oxoid公司产品，阿米卡星、头泡哌酮、庆大霉素、氧氟沙星、舒巴坦、甲氧茉噪、头孑包咲辛、克拉维酸、头孑包曲松、亚胺培南、头孑包曝月亏、环丙沙星、头抱他唳、头砲西丁、头孑包毗月亏、头抱哌酮、氨曲南等，这些均是为北京天坛药物生物技术开发公司的产品。PCR扩增试剂盒、染色体DNA提取试剂、质粒碱裂解提取试剂均为上海申能博彩生物公司产品。琼脂选择的是杭州天和微生物试剂有限公司生产的产品。1.5PCR检验方法检测耐药基因采用上海艾测电子科技有限公司生产的PCR仪器来检验菌株中的耐药基因，采用蛋白酶K法和碱裂解法对其中的染色体基因和

6、被测细菌质粒基因进行检测，耐药株选择采用primer软件设计引物，并且参考GenBank提供的耐药基因，PCR的产物需要在含0.5μg/ml澳化乙锭的基础上，在1.5%的琼脂糖凝胶上进行电泳，之后在紫光灯下等待结果，最后在凝胶成像系统上进行成像处理。1.6三维试验检测ESBLs和AmpC酶参照吴伟元［4］和Coudron［3］报告的酶提取物三维试验作部分修改进行检测。2、结果2.1药敏结果：通过与基因库的比对发现，所选的6株鲍曼不动杆菌人多数是多重耐药菌株。2.2在三维试验中：此类菌株均产生了ESBLs,有4株菌株产生了AmpC酶。2.3耐药基因检测：在6株鲍曼不动杆菌的耐

7、药基因型检测中发现有4株AmpC酶阳性，6株均为TEM阳性，4株为PER阳性，4株为OXA-24.VIM、IMP和VEB型等均为阴性,6株OXA-23型均阳性。3、讨论导致医院感染的细菌有很多，鲍曼不动杆菌就是其中较为常见的一种。随着现在广谱抗菌药的滥用，抗生素的选择压力不断加人，鲍曼不动杆菌的分离率也呈现出明显的逐年上升的趋势。本研究中的6株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌均产生了OXA・23型碳青霉烯酶［2］。6株菌的扩增产物测序结果与目标基因的测序结果相一致，所有基因有99%同源性。