耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶检测及同源性分析

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1、耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶检测及同源性分析·154·◇临床医学研究◇安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2012Feb；47（2）1，21芮晓艳，胡杰贵3摘要目的了解临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌采用Mi-（IRAB）碳青霉烯酶的基因型及同源性。方法重复计入。1．2试剂与主要仪器croScanWalkAway-40微生物分析仪进行菌株鉴定和药敏试23、OXA-24、OXA-51、验，聚合酶链反应（PCR）检测OXA-OXA-58组碳青霉烯酶基因型，肠杆菌科重复序列PCR（ERIC-P

2、CR）检测耐药基因阳性菌株的同源性。结果64株IRAB均为多重耐药菌株，其中10株（15.6%）为泛耐药51株（79.7%）blaOXA-23阳性，4株（6.3%）blaOXA-58阳菌株，57株（89.1%）blaOXA-66/blaOXA-51组阳性。ERIC-PCR结果性，显示blaOXA-23阳性菌株中47株为同一基因谱。结论菌株间可———————————————————————————————————————————————能存在克隆传播。的重要机制，关键词鲍曼不动杆菌；碳青霉烯酶；同源性R378.99；R978.11中图分类

3、号产OXA-23型碳青霉烯酶是我院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药头孢哌酮/舒巴坦和米诺环10×PCR素药敏纸片购自英国Oxiod公司；Taq酶、dNTPMixture购自大连宝生物公司；PCR引Buffer、物由上海生工生物工程有限公司合成；DNA扩增仪购自德国Biometra公司；凝胶成像系统购自上海天能公司。1．3菌株鉴定和药敏试验采用MiroScanWalk-Away-40全自动微生物分析仪及其配套的NegativeComboPanelTgpe31（革兰氏阴性复合板31）进行细头孢哌酮/舒巴坦和米诺环素药菌鉴定及药敏试验，敏试验为纸片

4、扩散法。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853，大肠埃希菌ATCC25922，药敏试验判断标准CLSI2008。1．4碳青霉烯酶基因检测及测序采用煮沸法提取细菌总DNA。PCR反应体系均为50μl，包括510×PCRBuffer5μl，Taq酶（5U/μl）0.25μl模板，文献标识码A文章编号1000－1492（2012）02－0154－04———————————————————————————————————————————————Ab）是鲍曼不动杆菌（Acinetobacterbaumannii，非发酵的需氧的革兰阴性杆菌，广泛

5、的分布在医院是引起医院感染的重要的条件致病菌，尤其环境中，是重症监护病房，可引起多种院内感染，包括败血症、肺炎、心内膜炎、脑膜炎、伤口的感染或泌尿系统［1］Ab对多种抗生素天然耐药，碳青霉烯类的感染，对不动杆菌属有较好的抗菌活性，是治疗不动杆菌属严重感染的首选药物，近年来Ab对碳青霉烯类的耐药率呈上升趋势，给临床治疗带来很大的困难。本研究收集临床分离耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌（imipenemresistantAcinetobacterbaumannii，IRAB），检测碳青霉烯酶基因型及菌株间同源性。11．1材料与方法dNTPMixtu

6、re4μl，μl，上、下游引物（20μmol/L）各1μl，双蒸水33.75μl，各种靶基因引物序列和反应［2－3］。PCR扩增产物经1.5%的琼脂糖条件见表1凝胶电泳，溴化乙锭染色，用凝胶成像系统观察结果。PCR阳性产物委托上海生工生物工程有限公司双向测序，测序结果在GenBank中比对。表1引物名称blaOXA-23-like-F-RblaOXA-24-like-F-RFblaOXA-51-like--R———————————————————————————————————————————————blaOXA-58-like-F-R

7、靶基因PCR引物序列引物序列（5'-3'）GATGTGTCATAGTATTCGTCGTCACAACAACTAAAAGCACTGGGTTAGTTGGCCCCCTTAAAAGTTGAGCGAAAAGGGGATTTAATGCTTTGATCGGCCTTGTGGATTGCACTTCATCTTGGAAGTATTGGGGCTTGTGCTGCCCCTCTGCGCTCTACATAC599523535224652产物长度（bp）1067退火温度（℃）52菌株来源收集安徽医科大学第一附属医院2009年1月～2009年12月住院患者送检的痰液标

8、本中分离的64株IRAB，同一患者多次分离标本未2011－09－01接收作者单位：安徽医科大学第一附属医院呼吸内科、感染科，合肥230022—————————————————————————————————