耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制研究

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1、耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制研究作者：方平潘晓龙周东升吴祥林【摘要】目的研究鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法对临床分离的3株耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌，采用KB纸片扩散法(CLSI/NCCLS2004年标准)进行药敏试验，三维试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR方法检测TEM、SHV、PER、VEB、AmpC、IMP、VIM、OXA23和OXA24等9种耐药基因型，PCR阳性产物进行基因测序，结果在GenBank基因库中比对分析。结果3株鲍曼不动杆菌为多重耐药菌株，三维试验均产生ESBL

2、s，1株产生AmpC酶，耐药基因型检测3株TEM阳性，2株PER阳性，2株AmpC酶阳性及SHV、VEB和IMP、VIM、OXA24型等均为阴性；3株OXA23型均阳性；另外27株对亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌IMP、VIM、OXA23和OXA24型检测结果均阴性。结论耐亚胺培南鲍曼不动杆菌携带TEM、PER、非诱导AmpC酶、OXA23型碳青霉烯酶基因，产生OXA23型碳青霉烯酶是主要耐药机制。【关键词】鲍曼不动杆菌OXA23型碳青霉烯酶耐药基因型Mechanismofimipenem

3、resistanceinAciobacterbaumanniiABSTRACTObjectiveTostudythemechanismofimipenemresistanceinAciobacterbaumannii.MethodsAntimicrobialsusceptibilitytestanniiisolatedinTonglingbyKirbyBauermethod.ResultsendedbyCLSI/NCCLS(2004).ThedetectionofESBLsandAmpCβla

4、ctamasesedbythreedimensionaltest,thegenotypeofTEM,SHV,PER,VEB,AmpC,IMP,VIM,OXA23,OXA24,andthedetectionandsequenceanalysisedbypolymerasechainreaction(PCR).ResultsThreestrainsinAciobacterbaumanniiultidrugresistant.ThreestrainsofimipenemresistancepCg

5、ene,OXA23typegeneipenemsusceptibilityinAciobacterbaumanniianniicarriedTEM,PER,AmpCandOXA23typegene,productionofOXA23carbapenemaseinAciobacterbaumanniiainmechanismsofimipenemresistancetheTonglingPeople′shospital.KEY26型大肠埃希菌和高产AmpC酶阴沟肠杆菌029M标准株由安徽医科

6、大学第一附属医院惠赠；大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603由本实验室保存。1.3药敏试验采用KB［CLSI/NCCLS(2004)标准］纸片扩散法，药敏纸片：阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/三唑巴坦、替卡西林/克拉维酸、头孢呋辛、头孢曲松、亚胺培南、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢西丁、氨曲南、头孢哌酮、头孢哌酮/舒巴坦、甲氧苄啶/磺胺甲口恶唑为英国Oxoid公司产品，庆大霉素、阿米卡星、氧氟沙星、环丙沙星为北京天坛药物品鉴定所生物技术开发公司产

7、品。MH琼脂为法国BioMerieux公司产品；质粒碱裂解提取试剂、染色体DNA提取试剂、PCR扩增试剂盒为上海申能博彩生物公司产品。1.4主要仪器设备法国BioMerieux公司生产的Vitek32型全自动微生物鉴定仪；日本SanyoMDF382型超低温冰箱；德国Hettich公司产品MIKRO22R型低温超速离心机；美国PERKINELMER公司9600型基因扩增仪；美国SHELLAB水套式恒温培养箱；北京六一DYY11B型电泳仪。1.5三维试验检测ESBLs和AmpC酶参照Coudr

8、on［3］和吴伟元［4］报告的酶提取物三维试验作部分改进。1.6PCR方法检测耐药基因采用碱裂解法和蛋白酶K法提取被测细菌质粒基因和染色体基因，耐药基因引物根据GenBank提供的耐药基因采用primer软件设计引物，部分引物序列参考有关2.4测序结果a009株PER型PCR扩增阳性产物在BLSAT网上比对分析，与目标基因(Z21957)有100%的同源性；a4001AmpC酶基因PCR阳性产物与染色体介导的高产AmpC酶目标基因(AJ009979)有99%的同源性；