伤寒杆菌实验室诊断

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1、伤寒杆菌实验室诊断研究进展來源：屮国论文下我屮心［07・12・2411:56:00］作者：黄水亮编轲：studa20【关键词】伤寒杆菌；检测方法：实验室诊断伤寒是山伤寒杆菌引起的肠道传染病，除引起肠道病变外，还能导致其他誥官或全身感染，严重威胁人民的健康。伤寒杆歯的诊断依据主要为临床症状及实验宅诊断。肥达试验和细菌培养是诊断伤寒杆菌的传统方法，但敏感性低且费时。近年來出现的免疫学检测方法和聚合酶链反应技术具有较疏的轉异性和敏感性,ri操作简单、快速。本文就伤寒杆菌实验室诊断方法综述如下。1细菌培养培养是厳常用确诊伤寒的诊I

2、析依据，由于特界性离，不出现假阳性而被称为金标准。血液和什简穿剌液先用亚硒酸盐胱妃酸増茵液进行增菌培养，粪.尿可直接接种于SS培养基.经历37°C24h培养后从SS培养基上挑取较小的无色或淡黄色菌落，首先进行革兰染色镜检，镜下为革兰染色阴性,呈短杆状,无芽胞，无荚膜。挑选可疑菌落,接种双糖铁,作血清学鉴定为沙门菌属D组后,进一步作生化反应，即伤寒杆蘭不分解乳粗h脏榊及斂李糖.能分解匍萄糖，产酸不产气，赖氨酸脱竣酌阳性，谷氨酸脱竣猶阴性，甲基红试验阳性。副伤寒杆悄形态与伤寒杆菌相似，能分鱒筍萄糖，产酸产气。临床上伤寒患者在体

3、温上升阶段，在抗生索应川之前作血培养，阳性率可在80%以上，在发病第2周、第3周，粪便培养阳性率可达到60%。培养结果容易受抗生索、培养条件、标木采集的质、显和时间等多因素彩响,带菌者检出率较低,结果报告也常需3d〜5d的时间。2血清学反应肥达试验足常川于辅助诊斯伤寒的传统方法。其原理是用伤寒杆菌的菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原以及副伤寒甲、乙、丙菌液与稀释的待测血淸反应，很据凝集效价判断血淸中有无伤寒杆菌的抗体。伤寒病发作后，约在第5天出现O抗体，第10天〜第12天产生H抗体。早期肥达试验需要急性期和大约间隔10天的庶复

4、期血湖两份标本之间抗O抗体或抗H抗体滴度升离4倍，更有诊断总义。伤寒杆菌的O抗原与A群.B群沙门氏菌有部分相同抗原.与甲、乙两种副伤寒杆菌有一定的交叉反应.因此.肥达反应诊断伤寒杆菌常出现假阳性.特异性差，敏感性低.而且抗原抗体结合出现凝集沉淀常需要2（）h以上。3免疫学方法3.1酶联免疫吸咐试验（ELISA）根据抗原或抗体特异性免疫反应原理设计.将己知的抗原或抗体结合在某种固相我体上.以辣根过氧化商为折示剂，标记在另-•种抗原或抗体上，加入酶作用底物，商与底物发生反应后，底物显色，根据底物显色的滋践定性或定虽地检测样本中

5、的抗体或抗原。3.1.1双抗体夹心ELISA法检测的是血清中的伤寒杆菌或伤寒杆菌抗原。其原理是：用于包被的抗体和酶标记的抗体是针对伤寒杆菌鞭毛抗原（H抗原〉的单克隆抗体。与甲.乙、丙型副伤寒杆菌.大肠杆甫、亂伤寒沙门氏鬲、肠炎沙门氏菌.猪後乱沙门氏茵等无交叉反应，但伤寒杆茵H抗原仅有的第一相（d）,与斯坦利等一些罕见的沙门氏iW有相同的相位，斯坦利菌虽然不引屈类似伤寒的疾綺，但可使结果出现假阳性；据文献报道有少数健康人血消也能使X!（抗体夹心法的结果呈阳性［1］。因此，ELISA法特异性有一・定的局限性.阳性结果表明有伤寒

6、杆菌或伤寒抗原存在的可能恂但此法敏感性瓶阴性结果可靠。该方法操作简便，约40minUP能报告结果，具有早期诊断价值，适川于疾病预防部门对从业人员定期检测伤寒杆歯帯lW者，追踪传染源•在流行病学上有重耍意义。3.1.2斑点酌联免疫吸附试验（DotELISA）DotELISA的基本原理是双抗原夹心法。伤寒杆菌的脂多糰（LPS）即O抗原能刺激机体产生IgM抗体，H抗原能刺澈机体产生IgG抗体。通过检测患者血清中的IgM、IgG抗体，即可知道是否感染了伤寒杆菌。CardonaCastiu［2］等以硝酸纤维索膜为载体，用伤寒杆菌的I

7、gG、lgM抗原包被，利用微孔滤膜的可过濾性使抗原抗体发生反应，建立DotELEA试臨对102例伤寒患者在发病不同的时间段进行检测，结果显示，IgG抗体的敏感性和和特异性分別为88%和88%,IgM抗体的敏感性和特异性分别为12」％利97%。Khan[3]等用DoiELISA法对128例疑似伤寒患者进行检测,以骨制培养为金标准,DoiELEA法的坡感性和特片性分別为71%和43%。文献报道DotELISA法的坡感性和特异性的差井较大.可能与研究者研究的对象和lgM.IgG抗体在患者体内产生的时间有关。3.2浸染试验(Dip

8、slickassay)又称快速试纸法。Dipslick是近年发展起來的-种用胶体金作指示剂的快速诊断方法。基本原理是先将特异性的抗原或单克隆抗体固定于试纸条(硝酸纤维薄膜)的i端，检测时将试纸条的另-•端浸入待测样品，山于毛细管作用，样品液向询移动，如待测样品中含有相应的抗体或抗原，则当样品液移至固定有