伤寒杆菌实验室诊断研究进展

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1、伤寒杆菌实验室诊断研究进展【关键词】伤寒杆菌；检测方法；实验室诊断　　伤寒是由伤寒杆菌引起的肠道传染病，除引起肠道病变外，还能导致其他器官或全身感染，严重威胁人民的健康。伤寒杆菌的诊断依据主要为临床症状及实验室诊断。肥达试验和细菌培养是诊断伤寒杆菌的传统方法，但敏感性低且费时。近年来出现的免疫学检测方法和聚合酶链反应技术具有较高的特异性和敏感性，且操作简单、快速。本文就伤寒杆菌实验室诊断方法综述如下。　　1细菌培养　　培养是最常用确诊伤寒的诊断依据，由于特异性高，不出现假阳性而被称为金标准。血液和骨髓穿剌液先用亚硒酸

2、盐胱氨酸增菌液进行增菌培养，粪、尿可直接接种于SS培养基，经历37℃2411h培养后从SS培养基上挑取较小的无色或淡黄色菌落，首先进行革兰染色镜检，镜下为革兰染色阴性，呈短杆状，无芽胞，无荚膜。挑选可疑菌落，接种双糖铁，作血清学鉴定为沙门菌属D组后，进一步作生化反应，即伤寒杆菌不分解乳糖、蔗糖及鼠李糖，能分解葡萄糖，产酸不产气，赖氨酸脱羧酶阳性，谷氨酸脱羧酶阴性，甲基红试验阳性。副伤寒杆菌形态与伤寒杆菌相似，能分解葡萄糖，产酸产气。临床上伤寒患者在体温上升阶段，在抗生素应用之前作血培养，阳性率可在80%以上，在发病第

3、2周、第3周，粪便培养阳性率可达到60%。培养结果容易受抗生素、培养条件、标本采集的质、量和时间等多因素影响，带菌者检出率较低，结果报告也常需3d～5d的时间。　　2血清学反应　　肥达试验是常用于辅助诊断伤寒的传统方法。其原理是用伤寒杆菌的菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原以及副伤寒甲、乙、丙菌液与稀释的待测血清反应，根据凝集效价判断血清中有无伤寒杆菌的抗体。伤寒病发作后，约在第5天出现O抗体，第10天～第12天产生H抗体。早期肥达试验需要急性期和大约间隔10天的康复期血清，两份标本之间抗O抗体或抗H抗体滴度升高4倍，更

4、有诊断意义。伤寒杆菌的O抗原与A群、B群沙门氏菌有部分相同抗原，与甲、乙两种副伤寒杆菌有一定的交叉反应，因此，肥达反应诊断伤寒杆菌常出现假阳性，特异性差，敏感性低，而且抗原抗体结合出现凝集沉淀常需要20h以上。　　3免疫学方法　　3.1酶联免疫吸咐试验(ELISA)11根据抗原或抗体特异性免疫反应原理设计，将已知的抗原或抗体结合在某种固相载体上，以辣根过氧化酶为指示剂，标记在另一种抗原或抗体上，加入酶作用底物，酶与底物发生反应后，底物显色，根据底物显色的深浅定性或定量地检测样本中的抗体或抗原。　　3.1.1双抗体夹心

5、ELISA法检测的是血清中的伤寒杆菌或伤寒杆菌抗原。其原理是：用于包被的抗体和酶标记的抗体是针对伤寒杆菌鞭毛抗原（H抗原）的单克隆抗体。与甲、乙、丙型副伤寒杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌等无交叉反应，但伤寒杆菌H抗原仅有的第一相（d），与斯坦利等一些罕见的沙门氏菌有相同的相位，斯坦利菌虽然不引起类似伤寒的疾病，但可使结果出现假阳性；据文献报道有少数健康人血清也能使双抗体夹心法的结果呈阳性［1］。因此，ELISA法特异性有一定的局限性，阳性结果表明有伤寒杆菌或伤寒抗原存在的可能性，但此法敏

6、感性高，阴性结果可靠。该方法操作简便,约40min即能报告结果，具有早期诊断价值，适用于疾病预防部门对从业人员定期检测伤寒杆菌带菌者，追踪传染源，在流行病学上有重要意义。　　3.1.2斑点酶联免疫吸附试验（DotELISA）DotELISA的基本原理是双抗原夹心法。伤寒杆菌的脂多糖（LPS）即O抗原能剌激机体产生IgM抗体，H抗原能刺激机体产生IgG抗体。通过检测患者血清中的IgM、IgG抗体，即可知道是否感染了伤寒杆菌。CardonaCastro［2］等以硝酸纤维素膜为载体，用伤寒杆菌的IgG、IgM抗原包被

7、，利用微孔滤膜的可过滤性使抗原抗体发生反应，建立Dot11ELISA试验。对102例伤寒患者在发病不同的时间段进行检测，结果显示，IgG抗体的敏感性和和特异性分别为88%和88%，IgM抗体的敏感性和特异性分别为12.1%和97%。Khan［3］等用DotELISA法对128例疑似伤寒患者进行检测，以骨髓培养为金标准，DotELISA法的敏感性和特异性分别为71%和43%。文献报道DotELISA法的敏感性和特异性的差异较大，可能与研究者研究的对象和IgM、IgG抗体在患者体内产生的时间有关。　　3.2浸染试

8、验（Dipstickassay）又称快速试纸法。Dipstick是近年发展起来的一种用胶体金作指示剂的快速诊断方法。基本原理是先将特异性的抗原或单克隆抗体固定于试纸条（硝酸纤维薄膜）的一端，检测时将试纸条的另一端浸入待测样品，由于毛细管作用，样品液向前移动，如待测样品中含有相应的抗体或抗原，则当样品液移至固定有抗原或抗体区时会发生特异性结合，在